Астрономия и микроскопия

Ну да ГРИП то понятно меньше для 0,40 он составит примерно 1,7-1,8мкм но ведь то что слегка вываливается из ГРИП все равно попадает на фоторегистратор и дает засветку плюс физическая возможность позиционирования фокусировки. Хотя возможно особо дорогие модели могут похвастаться и лучшими параметрами. А вот при толстом препарате конофокалка проявляет себя во всей красе.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
АУ-12 (мби-3, ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc

Сейчас уже точно не найду ту ссылку, но в книге Основы Микроскопии (Виноградова, Захаров, 2020) на 357 странице есть такая фраза « Для проведения объемной реконструкции или получения ортогональных проекций количество срезов должно быть таким, чтобы на изображении не проявлялась дискретность структуры (например, 30 – 100 срезов). При этом шаг выбирают равным или немного меньшим, чем аксиальная разрешающая способность объектива”

Т.е по аксиальной разрешающей способности объектива можно примерно установить толщину сканируемого среза. 7 мкм для биологической ткани это очень тонко, даже парафиновые срезы обычно толще раза в два.

________________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

Нет. Это вообще какая-то ерунда никому не нужная.
Микроскопия с использованием структурированного освещения = Structured Illumination Microscopy (SIM)
https://www.sciencedirect.com/topics/en ... microscopy
Иначе говоря методы сканирования сетчатыми диафрагмами, установленными вместо полевой:
spinning disk microscopy, Apotome и т. д.
Некоторые ошибочно относят методы к конфокалам, но это не так, по сути это промежуточный вариант между конфокалами и обычно флюоресценцией.

очень интересно! сейчас ознакомлюсь https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ful ... 00.00710.x

________________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

SIM метод очень интересный, я пока вникаю в него, но есть ряд практических вопросов

1) Где взять сетчатую диафрагму с нужными расстояниями между линиями сетки и каковы эти расстояния (близко к дифракционному пределу)?
2) Сетчатая диафрагма стоит в флуоресцетном микроскопе в фокальной плоскости?
3) как мне определить фокальную плоскость своего Leitz Laborlux S?

________________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

Приведу пока перевод методической части статьи, которую я выбрал в качестве первоначального ориентира

Методы

Обзор

Был собран простой микроскоп с структурированным освещением. Проходящий свет проходит через фазовую решетку с линейным рисунком, расположенную в плоскости формирования вторичного изображения в микроскопе. Линза объектива микроскопа проецирует на образец уменьшенное изображение этой решетки с интервалом между линиями, близким к дифракционному пределу линзы объектива. Ориентация и фаза результирующего полосатого рисунка освещения регулируются вращением и поперечным перемещением решетки.


Микроскоп

Лазерный луч был
1) пространственно скремблирован,
2) пропущен через многомодовое оптическое волокно и
3) линейно поляризован.

Фазовая решетка с линейным пропусканием помещалась во вторичную плоскость изображения микроскопа и освещалась из оптического волокна. Ориентация линий решетки была параллельна вектору поляризации света. Порядки дифракции +1 и -1 решетки сохранены; все остальные последовательности были заблокированы (Фазовая решетка дифрагировала 80% падающей световой мощности на эти два порядка.). Два луча были сфокусированы так, чтобы сформировать изображения торца волокна вблизи противоположных краев задней апертуры линзы объектива. Это привело к проецированию на образец высококонтрастного полосатого рисунка с межстрочным интервалом 0,23 мкм (теоретический предел разрешения объектива составлял около 0,22 мкм). Глубина модуляции полосового рисунка составила 70-90%.

Решетка была установлена на вращающемся пьезоэлектрическом трансляционном столике с замкнутым контуром, что позволяло регулировать ее ориентацию и поперечное положение, а, следовательно, и ориентацию и фазу рисунка световых полос. Поляризатор вращается вместе с решеткой, чтобы поддерживать поляризацию для максимального контраста рисунка.

Необязательно использовать лазерный луч; более низкая когерентность обычных источников света на самом деле была бы преимуществом. Однако из-за того, что падающий свет проходит только через небольшое подмножество задней фокальной плоскости объектива, оптический инвариант (площадь, умноженная на телесный угол) последовательности освещения меньше, чем в обычном микроскопе, поэтому традиционные протяженные источники, которые имеют больше значения оптического инварианта, были бы использованы неэффективно.

Это не является проблемой для лазеров, для которых оптический инвариант может быть близок к нулю. Лазерный свет был скремблирован (с использованием вращающегося голографического рассеивателя; Physical Optics Corporation) для уменьшения его пространственной когерентности, что имеет два преимущества: он ограничивает структуру освещения до конечной осевой протяженности, что полезно при построении трехмерных изображений, и делает систему гораздо менее чувствителен к нежелательным интерференционным полосам, вызванным пылью или случайными отражениями. Волоконное соединение здесь использовалось для улучшения воспроизводимости, но оно не является необходимым.

_______________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

1) дифракционные решетки
2) да
3) рассчитать относительно плоскости опоры объектива, будет зависеть от примененных объективов, длина тубуса, тип объектива RMS/DIN, если на бесконечность то от фокусного расстояния тубусной линзы.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
АУ-12 (мби-3, ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc

Может по этой узкоспециализированной тематике стоит начать отдельную тему?

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
АУ-12 (мби-3, ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc

На сколько я понимаю, обычная люминесценция не сравняется с конфокальной, даже на одном слое. Так как конфокал засвечивает одновременно одну точку на препарате, и там нет засветки от соседних точек, что повышает контраст.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-1, Микмед-2, Микмед-5, Zeiss Nf/ЛОМО, PZO Biolar PI

Спорный вопрос, конфокал конечно дает четкую картину, но на малых увеличениях разница невелика. Черно-белая фотка сделана на конфокале Leica SPE, цветная на Olympus BX51 камерой с сенсором Sony IMX178

______________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

А что имелось ввиду под "кольцо не раздвигается вручную"?

Всем доброго дня! интересует недорогой аналог линзы конденсора от Leica, на ней указаны следующие параметры - 0.55 S 28. Кто то может мне расшифровать что это значит? Спасибо!

_________________
Leitz Laborlux S
Olympus BX1

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

Зачем вам недорогой аналог - вы же настолько хорошо зарабатываете, что позволяете себе на форуме отпускать комментарии из серии "иди работай и зарабатывай больше нищеброд". Или "микроскоп ниже 400 долл/евро - не микроскоп". Стало быть, недорогие аналоги, вам покупать не к лицу. Заказывайте оригинал у Leica и он наверняка стоит дешевле ipad который может купить каждый и в любое время.

Как то поздно вы ответили,proton ! Не завидуйте, идите работать и будет вам своя
Leica в гараже

________________
Leitz Laborlux S
Olympus BX51

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А

Ну да, стандартное блеяние про зависть. Нечего выделываться говорю, особенно когда нечем.