Астрономия и микроскопия

Спасибо, попробую.

Нет, срезы не в парафине, режу свежий нефиксированный материал; обычно ручную резку рекомендуют делать в расщепленном стебле бузины, за неимением оной режу в топинамбуре, или в морковке, или в пробке; нож - опасная бритва. Есть самодельный "микротом" на базе микрометра (viewtopic.php?f=6&t=1603 , см. последний пост), цианоакрилатом были склеены две детали в этой конструкции (держатель обжимки и подшипник), к срезу этот клей касательства не имеет.

Duke, я последовал Вашему совету. Вот фотоотчет.
Фото 1 снято с моими старыми настройками.
Фото 2 - с настройками, рекомендованными Вами. Действительно, лучше.
На фото фрагмент фиксированного среза сосновой иголки, окраска в смеси фуксина, хризоидина и толуидинового синего; объектив 20х/0,4; снимок "как есть", без обработки.

Вот еще хотел поделиться программой, улучшалкой разрешения фотоснимков http://smartdeblur.net/. С помощью нее можно углубить фокус изображения, кривизну поля уменьшить.
Там она платная, но версия smartdeblur 1.27 - фриваре.

Спасибо. Скачал smartdeblur 1.27. Пробую. Но пока без особого успеха.

А вот еще такой любопытный объект. Поперечный срез листа нарцисса. Оказался для меня трудным - не могу подобрать окраску, каждый краситель красит его целиком, контрастной окраски разных тканей не получается. НО. В слое эпидермиса заметил устьица, в которых немного задержался хризоидин. Раньше видел их только "сверху" - в пленке эпидермиса, а тут вид сбоку. Фото 1 сделано с объективом 40х, фото 2 - 90х МИ. Оба фото со стекингом 8 кадров в PICOLAY.

Сосновые иголки уже были...

Еще один кадр - окрашенный срез в темном поле (Фото 1).

А вот совершенно другой вид сосны, иголка имеет другую структуру, смоляные канальцы залегают гораздо дальше от поверхности листа; срез свежий нефиксированный (из отбраковки - толстый); забавно напоминает кошачью мородчку (Фото 2).

А теперь окрашенный срез иголки новой сосны.

Фото 1. Объектив ПЛАН 9х. Любопытно, что эпидермис в основном прокрасился сафранином, а на уголках иголки - хризоидином.

Фото 2. Объектив 20х.

Оба фото со стекингом и последующей обработкой в SmartDeblur (последнее - по совету Duke).

Подготовка препарата:
1. Срез со свежей иголки.
2. Фиксация в ФАА примерно 30 мин. (до потери цвета хлоропластами).
3. Проводка через спирты 70%, 50%, 30% по 5 мин, помещение в дистиллированную воду.
4. Окраска 7 мин. в растворе фуксин 0,02% + сафранин 0,04% + хризоидин 0,04 % + уксусная к-та 2% в дист. воде.
5. Промывка в 2% уксусной к-те 5 мин.
6. Окраска 7 мин. в растворе анилиновый голубой водорастворимом 0,025% + уксусная к-та 2% в дист. воде.
7. Промывка в дист. воде.
8. Дифференцировка в глицерине - 2-3 часа (глицерин вымывает красители мягко, к тому же удобно контролировать насыщенность окраски, помещая время от времени срез под покровное стекло с глицерином).
9. Заключение в глицерин-желатину.

Фотки красивые. Всё лучше и лучше

_________________
Биолам Р11 с АПО и УФ объективами с СТ11, КФ-1 и КФ-4, Гамма 3D, АУ-26, Laboval 4 с Phv ахроматами, Peraval interphako, MB30 с ДИК и ФК KFZ (частично KFA и KFS), Биомед с набором ПЛАН ФК, Jenamed 2 с ФК

С осени в банке с морской водой у меня живет красная водоросль (багрянка). Решил порезать. Пока что нефиксированные срезы (срезы толстые, из отбраковки).
Фото 1 - срез в косом освещении, ПЛАН 9х. В большинстве хлоропластов преобладаюет красные пигменты фикобилины, хотя в центральной части есть хлоропласты с преобладанием зеленого хлорофилла.
Фото 2 - срез с того же стебля, окраска смесью толуидинового синего и метиленового синего, ПЛАН 9х.
Фото 3 - центральная часть среза крупным планом, 20х.

Сэм-59, красивые фото )))
Подскажите, а в какой программе Вы делаете стекинг? в фотошопе?

Спасибо, Юрий.

Для стекинга я использую 2 программы: Helicon Focus 5.1 (требуется ключ регистрации) и PICOLAY (свободная программа, рекомендовал Актис, можно скачать с http://www.picolay.de). Эти фото обработаны в PICOLAY.
Фотошопом, к сожалению, не владею, все никак не соберусь освоить, хотя уже давно пора.

Еще пару слов за рекомендованную Duke программу SmartDeblur. Интересная штука: если размер пятна Эйри, создаваемого объективом в пространстве изображений, больше пикселя матрицы, то с ее помощью можно улучшить четкость изображения (убрать размытость); но нужно, конечно, подобрать правильные настройки. По идее, следовало бы обработать каждый снимок, участвующий в стекинге, отдельно, а затем выполнить стекинг. На практике у меня лучше получатся наоборот, т.е. сперва стекинг, а потом снижение размытия.

Поперечные срезы листьев туи, по-видимому, Thúja occidentális.
Листья имеют чешуйчатую структуру.
На фото 1 - "чешуйки" примыкают к широкой стороне основного листа (или как это правильно назвать?).
На фото 2 - срез с того же образца, но здесь "чешуйки" примыкают к узкой стороне основного листа (слева внизу есть симметричная чешуйка, в кадр не помещается.
На фото 3 - центральная жилка (с проводящими каналами)
При изготовлении препаратов туи есть такое дело: срезы слипаются друг с другом, со срезами других растений, прилипают к кисточке; разлепить без повреждения не всегда удается.

Подскажите пожалуйста где вы покупаете реактивы для фиксации и окраски ???


В аптеке можете приобрести препарат "Фукорцин", копейки стоит, в его состав входит основной фуксин, он тоже неплохо красит.

А метиленовый синий , спирты , эфир и.т.п. где ?

рос26, в зависимости от Вашего географического положения могут быть разные варианты. Я на Украине, у нас метиленовый синий водный р-ор 1% и 96% этиловый спирт можно купить в аптеках; эфир купить нельзя - запрещен к продаже; фукорцин действительно содержит основной фуксин и фенол, он может заменить карболовый фуксин. Для фиксации формалином подойдет препарат Формидрон. Кристаллвиолет или метиловый фиолетовый содержится в фиолетовых чернилах "Радуга" для авторучек - пользовался, работает. Некоторые красители можно найти в пасхальных наборах для окраски яиц - см. ветку viewtopic.php?f=6&t=372.

Но если Вы живете в достаточно крупном городе, то можете найти фирмы, занимающиеся поставкой промышленной химии и лабораторных расходных материалов. "Открыв" такую возможность для себя, я перестал заморачиваться всякими аптеками и пр. - нашел такую фирму, которая продает даже по 1-2 грамма реактива и за очень гуманную цену. Но фирма, конечно, не продает запрещенных веществ без наличия соответствующей лицензии у покупателя.

рос26, вот пример окраски по Граму "из подручных средств".
Обнаружил на соленом огурце (давно лежал в холодильнике) колонию микроорганизмов.
1. Сделал отпечаток (мазок) на хорошо обезжиренном предметном стекле; стекла можно помыть в горячей воде с содой или хозяйственным мылом, затем обильно прополоскать проточной водой; лучше это делать в резиновых перчатках, чтобы тут же не испачкать их потожировыми выделениями с пальцев.
2. Сделанный отпечаток зафиксировал над газовой плитой: 3 раза провел над пламенем мазком вниз; стекло должно стать горячим, но рука должна "терпеть" его.
3. Положил на мазок квадратик из фильтровальной бумаги (промокашки, белой столовой салфетки) и накапал сверху фиолетовых чернил.
4. Через минуту убрал пинцетом бумагу, слил чернила и налил на мазок раствор Люголя (продается в аптеке; в отличие от канонического состава там есть еще глицерин, но он не мешает); тоже 1 минута.
5. Смыл со стекла остатки чернил и люголя проточной водой (пару секунд, без сильной струи; это не обязательно делать, но после такой промывки удобнее контролировать следующий этап)
6. Прополоскал мазок ок. 30 сек. в спирте - как только видите, что перестали отходить фиолетовые облачка красителя из мазка, - нужно вынимать из спирта.
7. Налил на мазок фукорцин, разведенный водой в отношении 1:3 (разводить надо непосредственно перед окраской, и совсем немного - оно не стойкое). Окраска минуту.
8. Ополоснул проточной водой, затем дистиллятом (дистиллят можно купить в рецептурной аптеке или в автомагазине), высушил мазок.
Смотреть с объективом 90х или 100х с масляной иммерсией.
Выглядит вот так:

Интересный эксперимент. Я окрашивал по Граму мазок слюны. Там много микроорганизмов. Причём как грамполож. так и грамотр. Фиксировать на открытом пламени лучше мазком вверх. Особенно занятно наблюдать когда в поле зрения микроскопа есть как фиолетовые так и красные микробы.

_________________
Биолам Р11 с АПО и УФ объективами с СТ11, КФ-1 и КФ-4, Гамма 3D, АУ-26, Laboval 4 с Phv ахроматами, Peraval interphako, MB30 с ДИК и ФК KFZ (частично KFA и KFS), Биомед с набором ПЛАН ФК, Jenamed 2 с ФК