Астрономия и микроскопия

Отлично! имея камеру горяева и физраствор из аптеки можно подсчитать количество эритроцитов и лейкоцитов дома. Конечно, очень удобно пользоваться микропипеткой от гемометра сали на 0,02 мл или аппарата панченкова или меланжерами. если такие достать не получится в крайнем случае можно воспользоваться инсулиновыми шприцами. чем меньше цена деления, тем меньше крови придется набирать. Разумеется подготовить скарификаторы, спирт вату, если не пробирки то сойдут маленькие прозрачные бутылочки или баночки. Понятное дело все должно быть чистым и сухим.

Разведение крови для подсчета эритроцитов делают в 200 раз.
для этого используют 3% р-р NaCl, для того чтобы эритроциты сморщились. Если есть точные весы и дистилированная вода то можно приготовит взвесив 3 г кухонной соли и довести объем до 100 мл, но вполне можно воспользоваться физраствором из аптеки. Если будете забирать кровь например инсулиновым шприцом на 100 единиц, в баночку для разведения налить 200 единиц физраствора (2 полных шприца) и внести 1 единицу крови. Перемешать промыванием шприца. Разведенная кровь в 200 раз готова.

Разведение крови для подсчета лейкоцитов делают в 20 раз.
разводят 4% р-ром уксусной кислоты, подкрашенным метиленовой синькой. На практике в лабораториях разбавляют водой столовый уксус 9% в 2 раза. Вместо метиленовой синьки можно капнуть немного йода до светло-желтого цвета. Йод окрасит ядра лейкоцитов в темный цвет, они станут более заметными а уксусная кислота разрушит оболочки эритроцитов для того чтобы не мешали при подсчете. Наливаем в другую бутылочку 20 единиц этого р-ра и добавляем 1 единицу крови. перемешиваем.

Далее готовим камеру горяева. Покровное стекло притираем до появления радужных колец (ньютона). это нужно для того чтобы "выдержать" точный размер камеры по высоте. Далее на одну сетку наносим полученые разведения эритроцитов а на другую лейкоцитов. ставим на микроскоп, ждем пару минут для оседания форменных элементов.

Эритроциты считаем в 5 больших (80 малых) квадратах по диаглнали. обратите внимание! те эритроциты, которые касаются или лежат на линиях сетки считаются только с двух сторон, например правой и верхней. В подсчитаном количестве переносим запятую на 2 знака и дописываем млн/мкл или *10в12/л. Например: насчитали 475 - результат 4,75*10в12/л

Лейкоциты считаем в 100 больших квадратах (во всех, которые не разграфленные на малые) а полученный результат умножаем на 0,05, дописываем единицы *10в9/л. Например: насчитали 148 - результат 7,4*10в9/л.

Как-то так.
Теперь вы умеете ключевые показатели анализа крови сделать самостоятельно, быстро и точно в домашних условиях!

Спасибо, буду пробовать.
Пипетка от аппарата Панченкова, это от СОЭ метра?
Если да, то какой у нее объем?
У меня есть пипетки Панченкова ПС/СОЭ-0,1.
0.1 - это ее объем?

Да, от СОЭ-метра. В этой пипетке 100 делений (длина измерительной шкалы 100 мм).
Одно деление шкалы равно 1 мкл (1*10^-6 л или 1/1000 мл или 0,001 мл)
Общий объем пипетки (до метки 0) равен 100 мкл или 1/10 мл или 0,1 мл

Вот и получается, что если вы будете набирать по 10 мкл (до метки 90) крови для анализа, то вам надо будет подговить:
для разведения эритроцитов 10*200=2000 мкл или 2,0 мл р-ра
для разведения лейкоцитов 10*20=200 мкл или 0,2 мл р-ра

Если планируете забирать по 20 мкл (0,02 мл), то берите раствора для разведения в 2 раза больше - 4,0 и 0,4 мл соответственно (шприцом например, если нет пипеток).

Боюсь что дальнейшее обсуждение немножко выходит за пределы данной темы форума, поэтому с радостью отвечу на дополнительные вопросы в ЛС.

А чем можно разводить кровь, чтобы клетки не меняли своей формы и размеров?

Физраствором из аптеки для капельниц, это 0,9% р-р NaCl. также этот раствор называется изотоническим - имеет равное с плазмой и внутриклеточным содержимым осмотическое давление.

Вы хотите под микроскопом пронаблюдать процесс гемолиза? добавьте к капле свеже-взятой капли крови каплю воды. вода через мембрану проникает внутрь клетки, эритроциты увеличиваются в размере и происходит разрыв клеточной мембраны, внутреннее содержимое клеток выходит в раствор, такая кровь уже не способна переносить кислород и углекислый газ.

Выхотите пронаблюдать за процессом плазмолиза? вместо воды добавить каплю гипертонического р-ра (сделайте приблизительно 3% (точность не нужна) раствор поваренной соли). Вы увидите как эритроциты сморщиваются, вследствие того, что излишняя вода из клеток выходит в р-р, выравнивая концентрацию внутриклеточного содержимого относительно внешней среды. Обратный процесс, деплазмолиза, можно вызвать просто добавив каплю воды.

Увидеть процесс образования тромба? Просто капнуть каплю крови на предное стекло и наблюдать как образуются тонкие нити фибрина. их становится все больше и больше и вскоре они образуют густую сеть, в которой, как рыба в неводе, запутываются кровяные клетки.

Процесс отрицательного хемотаксиса можно наблюдать следующим образом: рядом (2-5 мм одна от другой) с маленькой каплей с инфузориями или другими одноклеточными капаем каплю чистой воды. препаровальной или обычной иглой соединяем обе капли мостиком. в каплю с инфузориями помещаем кристалик кухонной соли. растворяясь, соль поднимает концентрацию в этой капле. наблюдаем как простейшие перемещаются через мостик в каплю с чистой водой, уходя из соленой.

Вы никак не можете "удержать простейшее в поле зрения" постоянно перемещая препарат и в итоге теряете из поля зрения? Приготовьте препарат "висячая капля". на средину покровного стекла наносим каплю с простейшими. стекло переворачиваем и помещаем на предметное стекло с лункой. в висячей капле микроорганизмы успокаиваются, перестают двигаться и поддаются более детальному изучению. перестают двигать жгутиками, можно проводить замеры. Если планируете наблюдать длительное время (несколько дней) края покровного стекла замазывают вазелином для предотвращения высыхания капли.

К сожалению не помогло. Как носились так и носятся...

Немного нагрейте препарат, не выше 40 градусов, некоторое время они будут неподвижны.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

а если уменьшить размер (объем) той самой капли?
кстати, вопрос об изготовлении предметного стекла с лункой уже поднимался ранее в этой теме. в домашних условиях можно просто покровное стекло поставить на спички, выложенные в форме квадратика по размеру покровного стекла. укрепите конструкцию тем же вазелином если планируете вести наблюдение несколько дней.

Наблюдал инфузорий в висячей капле и заметил какое-то странное существо, похожее то ли на лист, то ли еще на что. Перемещалось весьма странно - крутясь и вращаясь вокруг собственной оси. Было заметно, что шмыгающие инфузории этому организму немного мешают...
Вот видео. Прошу не кидать табуретками, так как снимал на мобильник прижатый к окуляру. Заранее пардон за качество.
http://www.youtube.com/watch?v=XVDh0_cP ... e=youtu.be
http://www.youtube.com/watch?v=rFXgC-Ec ... e=youtu.be
http://www.youtube.com/watch?v=YIzepirZ ... e=youtu.be
Может кто знает, что это за зверь?

guddini
По движением и так почти уверен что это Lembadion.

А как же определить, что я его нагрел не выше 40 градусов?

можно подогреть над лампой накаливания, особая точность не нужна. подогрейте до темперетуры чтобы легко могли удерживать стекло в руках.

А нагревательный столик СТН-1 случайно не для этого нужен?

Такой что-ли? Столик морозова?
http://www.astroscope.com.ua/stolik_mor ... /17408.htm
Что это за столик СТН-1?

два раза над пламенем спиртовки( в одном направлении, туда и обратно это 2 раза), индикатор вы должны спокойно притрагиваться к проведенному над пламенем стеклу.
Второй способ- это замедлить движение с помощью глицерина, но изменяется морфология( форма), концентрация глицерина подбирается эмпирически.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02