Мурмуревский писал(а):
По шарикам. Как я понял, при подсветке оптоволокном снизу в окулярах темный фон без шариков. При подсветке сверху оптоволокном шарики видны. На каком фоне? В виде чего вообще и ярко ли видны флуоресцирующие шарики, когда их видно? Какие у них спектральные характеристики?
Не может ли быть так, что предметное стекло частично блокирует или рассеивает возбуждающее излучение, и одиночным шарикам его уже недостаточно для выхода на предел видимости? Если взять уже видимый в обычном светлом поле сгусток шариков и тоже осветить его снизу через предметное стекло, он тоже не захочет флуоресцировать?
Можно попробовать взять другие предметные стекла и повторить опыт, можно даже взять покровное стекло в качестве предметного, использовав какую-нибудь рамку. А если сверху осветить совсем без покровного стекла? Шарики не станут ли ярче?
При подсветке снизу черный фон, при подсветке сверху точки на черном фоне. Использовались 200нм шарики с пиком на 488нм, освещение синим лазером на 450 и 490 нм. Светящихся точек было много, т.е контраст разительный, и это все делалось одновременно на одном микроскопе, просто переключая режимы. Я особо долго на этом не останавливался, так как смотреть на оптоволокно снизу даже с фильтрами так себе занятие. Несколько раз проверил препарат - все повторяется. Сгусток кстати наверное было бы видно, речь идет именно о диспергированной разбавленной смеси шариков.
Можно пробовать с разными предметными и покровными стеклми, но я не буду, так как подсветка снизу лазером или оптоволокном это априори вредно для глаз со всеми фильтрами, это никуда не пойдет скажем так. Задача сделать как можно лучше систему ведь. Если бы освещение снизу давало выйгрыш - это бы было в коммерческих моделях, а с 50-ых этого способа я особо не встречал. Так, темное поле только редко редко встречается