Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 16 май 2026, 19:27

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 688 ]  На страницу Пред.  1 ... 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 ... 46  След.
Автор Сообщение
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 21:59 
Не в сети

Зарегистрирован: 31 май 2013, 15:16
Сообщения: 3860
Откуда: Мончегорск
У меня только один вопрос. Как может падать разрешение при освещении снизу если свет возбуждения при люминисценции не используется для построения изображения? К нему только одно требование равномерно осветить объект.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
АУ-12 (мби-3, ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc


Последний раз редактировалось Mildi 22 апр 2026, 22:11, всего редактировалось 1 раз.

Вернуться к началу
 Профиль  
 

 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 22:07 
Не в сети

Зарегистрирован: 12 май 2025, 22:03
Сообщения: 1231
Тоже очень удивлён. Думал что единственная задача ультрафиолета даже не "осветить" объект в прямом смысле, а типа накачать его энергией для возбуждения, и сама она к построению картинки прямого отношения не имеет...


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 22:39 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Mildi писал(а):
У меня только один вопрос. Как может падать разрешение при освещении снизу если свет возбуждения при люминисценции не используется для построения изображения? К нему только одно требование равномерно осветить объект.


Вот не знаю. Значит как то используется. В формуле Аббе о разрешении микроскопа есть такой показатель n - показатель преломления среды. И если возбуждающий свет снизу проходит через два стекла (толстое предметное, тонкое покровное+сам объект), а не через одно (тонкое покровное + сам объект), то этот показатель наверное может меняться, и соответсвенно меняться само разрешение. Я не физик-оптик, я лишь предполагаю. Но факт с 200нм шариками имеет место быть, любой может сам проверить. Мне была бы как раз интересна независимая проверка, а то вдруг я чего не так понял или сделал :D Я помню я совместил плоемопак и оптоволокно и прям на одном препарате это все проверял, просто меняя свет между волокном снизу и плоемопаком сверху, и у меня черный фон (оптоволокно) менялся на яркий с шариками (плоемопак). При освещении же оптоволокном сверху под углом шарики снова становились видны. 200нм это кстати самая грань разрешения микроскопа, может на 300нм например этот эффект освещения снизу уже и не распространяется. Свет это вообще самое темное место в физике :D

PS. Шарики на Али продаются, флуоресцентные шарики или частицы называются, до 100нм диаметр даже возможен :) По неясным причинам этот тест с шариками в русскоязычной литературе почти никак не описан, и потому тут он мало известен

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Последний раз редактировалось Алексей Лк 22 апр 2026, 23:04, всего редактировалось 9 раз(а).

Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 22:49 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Вот что мне дал ИИ на запрос « как предметное стекло влият на показатель предомления среды»

Предметное стекло, используемое в микроскопии, выступает как прозрачная среда с более высоким показателем преломления, чем у воздуха, что напрямую влияет на ход световых лучей, проходящих через образец. Влияние стекла на показатель преломления среды можно описать следующими пунктами:

Высокий показатель преломления: Предметное стекло обычно изготавливается из стекла (крон), показатель преломления которого составляет около 1.51–1.52. Это значительно выше, чем у воздуха, что заставляет свет преломляться (изменять направление) при переходе из воздуха в стекло.

Искажение света: Если показатель преломления предметного стекла не соответствует показателю преломления препарата (образца) и заключающей среды, это приводит к искажениям света и снижению качества изображения

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 23:08 
Не в сети

Зарегистрирован: 12 май 2025, 22:03
Сообщения: 1231
Алексей Лк писал(а):
Свет это вообще самое темное место в физике :D

Шикарная фраза! Включу в избранное. :lol:


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 23:08 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Archie25 писал(а):
Алексей Лк писал(а):
Свет это вообще самое темное место в физике :D

Шикарная фраза! Включу в избранное. :lol:


Это я взял из книги про конфокальную микроскопию :)

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 23:23 
Не в сети

Зарегистрирован: 12 май 2025, 22:03
Сообщения: 1231
Реально хорошо.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 22 апр 2026, 23:28 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Изображениеfig 15 by Aleksey Lk, on Flickr

Есть еще тест USAF 1951 на разрешение, то же очень полезен в флуоресцентной микроскопии. Вот тут центральный ряд слева освещение с вибрацией оптоволокна, а справа оптоволокном без вибрации - почувствуйте что называется разницу :D Есть риск при освещении всеми этими лазерными светодиодами (без всего, как есть), что на выходе получится очень шумное изображение. Вибрирующее оптоволокно гасит шум в первую очередь, и с помощью манипулятора его можно очень точно навести на нужную область, которую нужно подсветить.

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 00:15 
Не в сети

Зарегистрирован: 12 май 2025, 22:03
Сообщения: 1231
Разница очень впечатляющая!


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 07:10 
Не в сети

Зарегистрирован: 04 ноя 2009, 18:46
Сообщения: 270
Откуда: Москва
По шарикам. Как я понял, при подсветке оптоволокном снизу в окулярах темный фон без шариков. При подсветке сверху оптоволокном шарики видны. На каком фоне? В виде чего вообще и ярко ли видны флуоресцирующие шарики, когда их видно? Какие у них спектральные характеристики?
Не может ли быть так, что предметное стекло частично блокирует или рассеивает возбуждающее излучение, и одиночным шарикам его уже недостаточно для выхода на предел видимости? Если взять уже видимый в обычном светлом поле сгусток шариков и тоже осветить его снизу через предметное стекло, он тоже не захочет флуоресцировать?
Можно попробовать взять другие предметные стекла и повторить опыт, можно даже взять покровное стекло в качестве предметного, использовав какую-нибудь рамку. А если сверху осветить совсем без покровного стекла? Шарики не станут ли ярче?

_________________
МББ-1А: АУ-26, ОИ-14, КФ-1, МФА-2, ОИ-17, ОИ-21
МИН-8: поляризация, ОИ-8, ОИ-12, ОИ-10, ОИ-13, ОИ-24
МБИ-4 с АУ-12 в качестве походного штатива
Ахроматы, планахроматы, апохроматы. 160, 190, ∞
МБС-1


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 08:59 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Мурмуревский писал(а):
По шарикам. Как я понял, при подсветке оптоволокном снизу в окулярах темный фон без шариков. При подсветке сверху оптоволокном шарики видны. На каком фоне? В виде чего вообще и ярко ли видны флуоресцирующие шарики, когда их видно? Какие у них спектральные характеристики?
Не может ли быть так, что предметное стекло частично блокирует или рассеивает возбуждающее излучение, и одиночным шарикам его уже недостаточно для выхода на предел видимости? Если взять уже видимый в обычном светлом поле сгусток шариков и тоже осветить его снизу через предметное стекло, он тоже не захочет флуоресцировать?
Можно попробовать взять другие предметные стекла и повторить опыт, можно даже взять покровное стекло в качестве предметного, использовав какую-нибудь рамку. А если сверху осветить совсем без покровного стекла? Шарики не станут ли ярче?


При подсветке снизу черный фон, при подсветке сверху точки на черном фоне. Использовались 200нм шарики с пиком на 488нм, освещение синим лазером на 450 и 490 нм. Светящихся точек было много, т.е контраст разительный, и это все делалось одновременно на одном микроскопе, просто переключая режимы. Я особо долго на этом не останавливался, так как смотреть на оптоволокно снизу даже с фильтрами так себе занятие. Несколько раз проверил препарат - все повторяется. Сгусток кстати наверное было бы видно, речь идет именно о диспергированной разбавленной смеси шариков.

Можно пробовать с разными предметными и покровными стеклми, но я не буду, так как подсветка снизу лазером или оптоволокном это априори вредно для глаз со всеми фильтрами, это никуда не пойдет скажем так. Задача сделать как можно лучше систему ведь. Если бы освещение снизу давало выйгрыш - это бы было в коммерческих моделях, а с 50-ых этого способа я особо не встречал. Так, темное поле только редко редко встречается

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 16:29 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
ИзображениеFig 7 by Aleksey Lk, on Flickr

Нашел вот те фотки с 200нм шариками, А, С - освещение плоемопаком, B, D - освещение оптоволокном сверху, увеличение 20х и 50х (100х оптоволкно уже не возьмет). Стрелками отмечены общие светящиеся шарики (скорее даже мини-сгустки, сами шарики выглядят как такая дымка) в разных участках поля зрения. Качество так себе, вживую это смотрится куда эффектнее. Оптоволокно (даже два оптоволокна) все таки освещает меньшую площадь, чем объектив, поэтому периферия кадра с оптоволокном выглядит темнее чем у плоемопака

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 19:50 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Да, если что эта идея с оптоволокном не моя, это концепт Ellis (1979), в 6й главе Handbook of confocal microscopy (2006) про это есть фрагмент. Я просто чуть изменил его схему, добавив микроманипуляторы

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 22:35 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 апр 2021, 20:58
Сообщения: 1834
Откуда: Москва
Что то я смотрю обсуждение подзатихло :)

_________________
Leitz Laborlux S
Leitz Dialux
Leitz Labovert
3D-vibrating microtome
Leica SM2000R
3D Gamma
Eppendorf 5171+5179
ФМЭЛ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
 Заголовок сообщения: Re: Люминесценция с боем и без!
СообщениеДобавлено: 23 апр 2026, 22:51 
Не в сети

Зарегистрирован: 12 май 2025, 22:03
Сообщения: 1231
Надо просто подбросить захватывающих снимков, сделанных этим девайсом! :-)


Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 688 ]  На страницу Пред.  1 ... 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 ... 46  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 23


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика