Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 12 июл 2020, 11:28

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 698 ]  На страницу Пред.  1 ... 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ... 47  След.
Автор Сообщение
СообщениеДобавлено: 28 сен 2014, 21:10 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
guddini писал(а):
Вот жеж красят люди....
http://zoom.ronaldschulte.nl/mu02/TemplateWebPage.htm


Это одна из прописей
Окрашивание азаном по методу Гейденгайна

^ Окрашивание азаном по методу Гейденгайна – является модификацией метода Маллори, что позволяет получать более четкоеокрашивание соединительной ткани, чем основной метод. Данную методику хорошо использовать при окраске железистой и других тканей. Окраска срезов лучше удается после сулемовых фиксаторов (жидкость Ценкера и её модификация по Максимову), можно и после простой формалиновой фиксации материала.

^ Приготовление растворов:

1. Раствор азокармина – к 100мл дистиллированной воды добавляют 0,1 г азокармина. Затем в течение нескольких минут кипятят и после охлаждения профильтровывают. К фильтрату добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты.

^ 2. Раствор анилинового синего и оранжевого G - к 100мл дистиллированной воды добавляют 0,5 г анилинового синего, 2,0 г оранжевого G. Смесь кипятят в течение 2-3 минут, охлаждают и профильтровывают. Перед употреблением раствор разводят в 2-3 раза дистиллированной водой.

^ 3. Раствор анилинового спирта – в 100 мл 90% спирта растворяют 0,1 мл анилинового масла (практически удобнее 1,0 мл анилинового масла растворить в 1 л спирта).

4. Уксуснокислый спирт – к 100 мл 96% спирта добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты.

^ 5. Раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты – 5 мг химически чистого препарата растворяют в 100 мл дистиллированной воды.
Пропись окрашивания азаном по методу Гейденгайна

Окрашивание срезов проводят следующим образом:

1. Срезы переносят в раствор азокармина и помешают на 1,5- 2 часа в термостат с температурой 56-60 градусов. Срезы для этого помешают в хорошо закрывающиеся биологические стаканчики (или бюксы) с притертой пробкой.

2. Далее стаканчик со срезами охлаждают при комнатной температуре в течение 10-15 минут.

3. Срезы извлекают из стаканчиков (или бюкса), ополаскивают в дистиллированной воде.

4. Срезы переносят в раствор анилинового спирта и выдерживают до тех пор, пока не будут четко выявлены ядра (контроль под микроскопом). Если не удается долго выявить ядра, можно добавить в раствор дистиллированной воды, что ускорит процесс дифференцировки;

5. После дифференцировки ядер быстро промыть в течение 1-2 минуты уксуснокислым спиртом.

6. Протрава срезов в растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты в среднем в течении 1-3 часов в зависимости от выявления элементов соединительной ткани под контролем микроскопа.

7. Ополаскивание в дистиллированной воде и переносят в разведенный раствор анилинового синего и оранжевого G – в течение 2-3 часов, после чего быстро ополаскивают в дистиллированной воде и переносят в 96% спирт для дифференцировки.

Результаты: при правильной дифференцировке коллагеновые и ретикулиновые волокна окрашиваются в синий цвет при отсутствии общего голубого тона, ядра клеток - в красный цвет. Мышечная ткань – в различные оттенки красно-оранжевого цвета.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 сен 2014, 21:27 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 25 сен 2013, 12:01
Сообщения: 1427
Откуда: Москва
Юрий писал(а):
Это одна из прописей
Окрашивание азаном по методу Гейденгайна
Спасибо. Для меня эти прописи - жесть суровая)))). Трудно самому осваивать на собственных ошибках.
Rasalam писал(а):
guddini писал(а):
Надыбал фиолетовые чернила Радуга? Их можно как нибудь использовать в качестве красителя?

Где-то читал, что фиолетовые чернила - генцианвиолет, если да, то можно попробовать покрасить бактерии по Грамму.

Я тоже где-то слышал. Но как правильно их (чернила) приготовить не знаю. В чистом виде использовать, или разводить их надо? Какая экспозиция? Может кто подскажет? Мне кажется Сэм-59 или Актис про это что-то знают.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 29 сен 2014, 02:57 
Не в сети

Зарегистрирован: 06 окт 2013, 18:17
Сообщения: 736
guddini писал(а):
Юрий писал(а):
Это одна из прописей
Окрашивание азаном по методу Гейденгайна
Спасибо. Для меня эти прописи - жесть суровая)))). Трудно самому осваивать на собственных ошибках.
Rasalam писал(а):
guddini писал(а):
Надыбал фиолетовые чернила Радуга? Их можно как нибудь использовать в качестве красителя?

Где-то читал, что фиолетовые чернила - генцианвиолет, если да, то можно попробовать покрасить бактерии по Грамму.

Я тоже где-то слышал. Но как правильно их (чернила) приготовить не знаю. В чистом виде использовать, или разводить их надо? Какая экспозиция? Может кто подскажет? Мне кажется Сэм-59 или Актис про это что-то знают.

Совершенно верно, фиолетовые чернила содержат генцианвиолет, если для окраски по Грамму, то можно и не разводить, всё равно будете промывать и дифференцировать спиртом. А для других целей, поскольку сейчас грибной сезон, попробуйте данными фиолетовыми чернилами, но уже в разведении( я разводил очень сильно) окрасить срез гриба - споры окрашиваются просто великолепно, у меня такой препарат в глицерине полгода сохранялся.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 29 сен 2014, 13:24 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 сен 2014, 11:40
Сообщения: 828
Откуда: Челябинск
guddini писал(а):
Мазок крови допустимо фиксировать в ацетоне, или не надА?

- из практики, если не предусматривается особая цитохимия, то мазки крови лучше всего фиксировать 96-95% этанолом (он же этиловый спирт) - обычный аптечный спирт, раньше был без рецепта, сейчас по рецепту. Но не во всех аптеках, да и взять рецепт на него особо не сложно у терапевта, он проходит как тривиальный антисептик. Т.е. тонким слоем макс в несколько мм заливаем плашмя уложенные мазки спиртом, ждём полного испарения оного, высыхания полного мазков и после этого, пожалуйста, окрашиваем на лейкограмму (лейкоформулу) или на другие структуры, но подчёркиваю, на те, где нет особых указания по процедуре фиксации мазков цельной крови.

_________________
МБР-1, МБИ-3, МББ-1А. Кандидат биологических наук (03.03.01 - Физиология). Интересы в области физиологии и гельминтологии.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 29 сен 2014, 15:47 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 25 сен 2013, 12:01
Сообщения: 1427
Откуда: Москва
Евгений251082 этанола у меня хоть залейся - не ограниченное количество в прямом смысле. Как мазки фиксировать в этаноле я знаю. Мне бы узнать, как эти чернила "Радуга" правильно развести, что бы лишнего не лить. На сколько мне известно Сэм-59 их использовал весьма успешно.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 29 сен 2014, 17:36 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 сен 2014, 11:40
Сообщения: 828
Откуда: Челябинск
guddini писал(а):
Евгений251082 этанола у меня хоть залейся - не ограниченное количество в прямом смысле. Как мазки фиксировать в этаноле я знаю. Мне бы узнать, как эти чернила "Радуга" правильно развести, что бы лишнего не лить. На сколько мне известно Сэм-59 их использовал весьма успешно.

- На счёт чернил не знаю))), но в любой лабе лучше попросить метиленовый синий и (или) генциан-виолет и усё))). Зачем вам эти чернила, тем более за временем, они потеряли многие свойства, коллоидность, в т.ч. на счёт красящих свойств не знаю. Попробуйте, если будут интересные результаты, обязательно сфотографируйте и продемонстрируйте :)

_________________
МБР-1, МБИ-3, МББ-1А. Кандидат биологических наук (03.03.01 - Физиология). Интересы в области физиологии и гельминтологии.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 30 сен 2014, 16:08 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
guddini писал(а):
..Мне бы узнать, как эти чернила "Радуга" правильно развести, что бы лишнего не лить...

Уважаемый guddini, фиолетовые чернила "Радуга" для авторучек в своем составе имеют кристаллвиолет (очень близок к генцианвиолету), воду и глицерин; со временем не заметил, чтобы они портились; возможно, стоит добавить в них чуть-чуть фенола (оно же карболка, будет карболовый кристаллвиолет) и профильтровать. Для окраски по Граму разводить не надо; "чернильную пропись" см. в этой же ветке viewtopic.php?f=6&t=1581&start=120#p25176. А для мицелия грибов, спор и растительных клеток - разведение нужно подбирать опытным путем с учетом последующей дифференцировки.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 12:07 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Коллеги, у кого есть практический опыт заключения препаратов в полистирол?

Сделал раствор полистирола с пластификатором ДБФ, как рекомендовано в viewtopic.php?f=6&t=1351&start=45#p21353. На практике получаю следующее:

1. Реальное время отвердения массы - до 3 суток; по периметру покровного стекла пленка действительно отвердевает достаточно быстро, за 20-30 минут. А под стеклом остается жидкая среда; при надавливании на стекло видно, как она перетекает. А в источнике указано время отвердения 1,5-2 часа...
"Но это еще нэ бэда, учитэль" (С).

2. "Бэда, учитэль, это когда" (С) по мере отвердения (высыхания ксилола) объем среды значительно уменьшается, и под покровным стеклом возникают пустоты. Если капать объем среды "с запасом на усушку", то покровное стекло застывает в позе "как Бог на душу положит", а не параллельно предметному.

В общем, есть ли какие-то тонкости этой процедуры, без учета которых результат будет "кривой"?


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 13:15 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
Сэм-59 писал(а):
Коллеги, у кого есть практический опыт заключения препаратов в полистирол?

Сделал раствор полистирола с пластификатором ДБФ, как рекомендовано в viewtopic.php?f=6&t=1351&start=45#p21353. На практике получаю следующее:

1. Реальное время отвердения массы - до 3 суток; по периметру покровного стекла пленка действительно отвердевает достаточно быстро, за 20-30 минут. А под стеклом остается жидкая среда; при надавливании на стекло видно, как она перетекает. А в источнике указано время отвердения 1,5-2 часа...
"Но это еще нэ бэда, учитэль" (С).

2. "Бэда, учитэль, это когда" (С) по мере отвердения (высыхания ксилола) объем среды значительно уменьшается, и под покровным стеклом возникают пустоты. Если капать объем среды "с запасом на усушку", то покровное стекло застывает в позе "как Бог на душу положит", а не параллельно предметному.

В общем, есть ли какие-то тонкости этой процедуры, без учета которых результат будет "кривой"?



Используем и успешно.
В практической патоморфологии широко используют синтетическую пластмассу — полистирол. Способ применения этого пластического материала предложен Д.С. Саркисовым и подробно изложен в руководстве Г.А. Меркулова «Курс патолого-гистологической техники» (1969). Полистирол хорошо растворяется в ксилоле и толуоле, прозрачен и быстро затвердевает под предметным стеклом, образуя тончайшую пленку. Метод растворения тот же, что и для смол растительного происхождения. Однако со временем полистирол становится хрупким, в пленке появляются трещины, что затрудняет микроскопическое исследование и совершенно неприемлемо для микросъемки.
Для предотвращения этих недостатков в 30 % раствор полистирола в ксилоле добавляют пластификатор, придающий пленке эластичность и гибкость, устраняя все недостатки полистирола.
В настоящее время в качестве пластификатора используют дибутилфталат, широко применяемый в электронной микроскопии.

Существует несколько вариантов приготовления полистирола для заключения препаратов:
1) 94 мл 30 % раствора полистирола в ксилоле смешивают с 6 мл дибутилфталата;
2) смесь, состоящую из 100 г полистирола, 100 мл ксилола и 12 мл дибутилфталата, растворяют при 22 °С или в термостате при 37 °С, периодически перемешивая.


Готовую синтетическую смолу хранят в плотно закрытой посуде. Технология заключения срезов та же, что и при
применении основных сред.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 13:23 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 сен 2014, 11:40
Сообщения: 828
Откуда: Челябинск
Или покупайте канадский бальзам (оригинальный), в проверенных магазинах лабораторной посуды и оборудования. В крупных городах такие магазины всегда есть. Там, обычно этот препарат заказывают у поставщиков, т.к. он, по понятным причинам весьма специфичен, но с его покупкой обычно нет никаких хлопот. Единственное, он дороговат. Но зато лишен всех недостатков полистирола и к тому же, действительно проверен веками.
Сам пользуюсь им, скоро снова придётся заказывать.

_________________
МБР-1, МБИ-3, МББ-1А. Кандидат биологических наук (03.03.01 - Физиология). Интересы в области физиологии и гельминтологии.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 14:15 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
Евгений251082 писал(а):
Или покупайте канадский бальзам (оригинальный), в проверенных магазинах лабораторной посуды и оборудования. В крупных городах такие магазины всегда есть. Там, обычно этот препарат заказывают у поставщиков, т.к. он, по понятным причинам весьма специфичен, но с его покупкой обычно нет никаких хлопот. Единственное, он дороговат. Но зато лишен всех недостатков полистирола и к тому же, действительно проверен веками.
Сам пользуюсь им, скоро снова придётся заказывать.


канадский бальзам заменить нечем, с этим не поспоришь. Но у него есть недостатки -это цена(Канадский бальзам Panreac две недели назад покупал, 1л- 213Евро, 100 мл-30 евро).
Полистирол вещь хорошая в патоморфологиии, без него никуда, нужно просто экспериментировать с сортами полистирола..

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 14:21 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 сен 2014, 11:40
Сообщения: 828
Откуда: Челябинск
Юрий писал(а):
Евгений251082 писал(а):
Или покупайте канадский бальзам (оригинальный), в проверенных магазинах лабораторной посуды и оборудования. В крупных городах такие магазины всегда есть. Там, обычно этот препарат заказывают у поставщиков, т.к. он, по понятным причинам весьма специфичен, но с его покупкой обычно нет никаких хлопот. Единственное, он дороговат. Но зато лишен всех недостатков полистирола и к тому же, действительно проверен веками.
Сам пользуюсь им, скоро снова придётся заказывать.


канадский бальзам заменить нечем, с этим не поспоришь. Но у него есть недостатки -это цена(Канадский бальзам Panreac две недели назад покупал, 1л- 213Евро, 100 мл-30 евро).
Полистирол вещь хорошая в патоморфологиии, без него никуда, нужно просто экспериментировать с сортами полистирола..

Ну да, так и есть..., он дорогой, для любителя это мало приемлемо, но я буду его брать для научной работы, поэтому придётся затянуть пояс)).
Да, кстати, в некоторых руководствах читал что в связи с собственной pH, сам канадский бальзам не подходит для некоторых особо чувствительных к кислотно основному равновесию цитохимических методов. Но это, только для узкой специфики.
Для общей гистологии, для тотальных препаратов зоологических объектов, это лучший вариант (практически - янтарь!), но очень дорогой, да.

_________________
МБР-1, МБИ-3, МББ-1А. Кандидат биологических наук (03.03.01 - Физиология). Интересы в области физиологии и гельминтологии.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 14:23 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
Евгений251082 писал(а):
Юрий писал(а):
Евгений251082 писал(а):
Или покупайте канадский бальзам (оригинальный), в проверенных магазинах лабораторной посуды и оборудования. В крупных городах такие магазины всегда есть. Там, обычно этот препарат заказывают у поставщиков, т.к. он, по понятным причинам весьма специфичен, но с его покупкой обычно нет никаких хлопот. Единственное, он дороговат. Но зато лишен всех недостатков полистирола и к тому же, действительно проверен веками.
Сам пользуюсь им, скоро снова придётся заказывать.


канадский бальзам заменить нечем, с этим не поспоришь. Но у него есть недостатки -это цена(Канадский бальзам Panreac две недели назад покупал, 1л- 213Евро, 100 мл-30 евро).
Полистирол вещь хорошая в патоморфологиии, без него никуда, нужно просто экспериментировать с сортами полистирола..

Ну да, так и есть..., он дорогой, для любителя это мало приемлемо, но я буду его брать для научной работы, поэтому придётся затянуть пояс)).
Да, кстати, в некоторых руководствах читал что в связи с собственной pH, сам канадский бальзам не подходит для некоторых особо чувствительных к кислотно основному равновесию цитохимических методов. Но это, только для узкой специфики.
Для общей гистологии, для тотальных препаратов зоологических объектов, это лучший вариант (практически - янтарь!), но очень дорогой, да.


Да, для окраски по Романовскому канадский не подходит, выцветает препарат за год

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 15:20 
Не в сети

Зарегистрирован: 06 окт 2013, 18:17
Сообщения: 736
Евгений251082 писал(а):
Или покупайте канадский бальзам (оригинальный), в проверенных магазинах лабораторной посуды и оборудования. В крупных городах такие магазины всегда есть. Там, обычно этот препарат заказывают у поставщиков, т.к. он, по понятным причинам весьма специфичен, но с его покупкой обычно нет никаких хлопот. Единственное, он дороговат. Но зато лишен всех недостатков полистирола и к тому же, действительно проверен веками.
Сам пользуюсь им, скоро снова придётся заказывать.


Можно попробовать и даммарный лак, в руководстве по микротехнике Кисели отмечается, что в отличие от канадского бальзама, даммарный лак имеет нейтральный pH( т.е. именно отмечается отсутствие влияния на окраску) и отвердевает он быстрее.
Я пользуюсь даммарным лаком от "Невской палитры"(магазины для художников :D ), единственно, его необходимо упарить наполовину( не менее) поскольку жидкий, на что уйдёт полгода. Не знаю, но мне нравится.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 28 ноя 2014, 15:32 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 13 сен 2014, 11:40
Сообщения: 828
Откуда: Челябинск
adam писал(а):
Можно попробовать и даммарный лак,....

Спасибо, да, читал о таком. Посмотрим, как понимаю, это тоже смола от хвойного дерева.
Когда был студентом, поступал вообще просто))). Собирал смолу сосны обыкновенной, смешивал её с ксилолом или толуолом доводил до жидкого состояния, фильтровал, и упаривал - склянку со смолой закрывал фильтровальной бумагой, завязывал нитками (чтоб растворитель испарялся и в то же время пыль не попадала). Короче, голь на выдумку хитра))). Знаю, по ряду показателям, она гораздо хуже канадской сосны и даммары, сохнет ооочень долго..., но препараты тотальные и некоторые срезы (гистосрезы) с начало двух тысячных до сих пор хранятся в отличном состоянии.
Но это делал из безвыходности, возможности достать именно, канадский, или тот же даммарский бальзам, никакой возможности не было, а хотелось, по человечески сделать "вечные" постоянные тотальные и срезы микропрепараты гельминтов, когда работал над курсовыми, а потом над дипломной, по зоологии)).

_________________
МБР-1, МБИ-3, МББ-1А. Кандидат биологических наук (03.03.01 - Физиология). Интересы в области физиологии и гельминтологии.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 698 ]  На страницу Пред.  1 ... 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ... 47  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 17


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика