Астрономия и микроскопия

Вода для инъекций подойдет?

может не подойти, как мне помнится там PH 5,0-7,0 может скакать.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02

Все как в видео про приготовление образцов панцирей диатомовых водорослей, только заключение в смесь канифоли и касторового масла специально для уменьшения разности показателей преломления между средой и объектами для "разглядывания" методом фазового контраста. Исходя из теории фазового контраста ("Микроскопы" Скворцов, Панов, Поляков, Федин), КФ-1 может однозначно преобразовывать разность фаз в интенсивность при разности фаз не более 45 градусов. Для длины волны 560 нм это соответствует 70 нм в разности оптического пути, что соответствует толщине объектов 1 мкм при разности показателей преломления 1.50-1.43=0.07.

С Новым Годом, дорогие коллеги.

Всем желаю успехов и приятных открытий, и не только в микромире.

Новогодний пост: разглядываем елочную иголку, а именно – ее срезы.

Поскольку фиксация материала вызывает обесцвечивание хлоропластов иголки (а что за новогодняя елка, если она не зеленая?), то первой очередью идут нефиксированные срезы.

Первое фото – срез в темном поле. Почему именно темное поле. Срез достаточно крупный, используется объектив ПЛАН 9х; с этим объективом требуется снимать верхнюю линзу конденсора, чтобы осветить все поле, но при этом теряется насыщенность цветов, срез видится серо-зеленоватым, а не зеленым; а вот в темном поле хлоропласты дают хорошее зеленое рассеяние. Интересная особенность у этой иголки – полость в правой части среза.

Второе фото – тот же срез в светлом поле с объективом 20х.

Третье фото – продольный срез иголки в плоскости, перпендикулярной широкой стороне; срез вышел слишком толстым (иголка плохо фиксируется в обжимке); эти срезы будем еще совершенствовать.

Пробую делать окрашенные срезы. Срез делаю со свежесорванной иголки и тут же помещаю в фиксатор ФАА. Затем промывка и обводнение в батарее спиртов 70% - 50% - 30%, в финале - дист. вода.

Фото 4. Объектив 20х. Срез окрашен в два этапа. Сперва окраска в смеси фуксина, сафранина и хризоидина, затем – в анилиновом голубом водорастворимом. Хлоропласты «потянули» на себя анилиновый голубой (кислотный краситель); сафранин придал розовый фон периметру среза (эпидермис?) и чему-то в центральной жилке; хризоидин дал почти коричневую окраску каким-то проводящим каналам в центральной жилке (я ожидал, что они будут ярко-желтыми, может, фуксин был лишним). Что-то не так в этой комбинации.

Фото 5. Объектив 20х. Для этого среза я выбрал эозин в качестве кислотного красителя, хлоропласты ожидаемо окрасились в розовый цвет; любопытно, что ядра клеток тоже немного «потянули» эозин, а хотелось бы их подкрасить контрастно! Основным красителем здесь был толуидиновый синий; кутикула от него приобрела голубоватый оттенок с фиолетовыми включениями, и ядра эпидермиса тоже стали фиолетовыми.

Поскольку (как в известном анекдоте про еврея, его кур и раввина) еще есть идеи и несколько красителей, то продолжение вскоре последует.

Нашел старый пост Актиса, тоже о елочной иголке: viewtopic.php?f=6&t=166&p=8391#p8391. Фото - загляденье. А полость, оказывается, - это смоляной канал.

Хорошее направление, похвально

Вручную качественный срез листочка ели сделать сложновато, необходимы тренировки. Так как листочков на новогодней ели много, то можно тренироваться ежедневно три раза в день.

По красителям. Толуидиновый синий лучше использовать при окраске свежих срезов, не фиксированных.
Фуксин кислый или основной? Если основной, то раствор лучше готовить в 50%-м этиловом спирте или в 2%-й уксусной кислоте.

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/

Спасибо за совет, Актис. Да, я тоже заметил, что с нефиксированными срезами красители "работают" иначе. Только для этих опытов пока выделял отбракованнные срезы (толстые). Пример - на фото 6, нефиксированный срез после окраски в смеси азура с хризоидином.Фуксин основной, у мена заготовлены насыщенный спиртовой раствор и карболовый по Цилю. Для окраски использую разведенный фуксин Циля (водный фуксин по Пфейферу).

Хорошо получается.

Спасибо, Тимофеюс! Еще бы пристойную камеру...Да уж. Особенно продольный срез. Вот, однако, образчик: фото 7 - продольный радиальный нефиксированный; фото 8 - этот же срез подкрашенный смесью азура с хризоидином (оба красителя не для цитоплазмы, поэтому, наверное, много бесцветных клеток).

С поперечными срезами легче.

Резал в пробке (не всякая годится, нужно подбирать).
Отчитываюсь: фото 9 - свежий срез; фото 10 - этот же срез подкрашенный толуидиновым синим; фото 11 - срез из этой же серии, подкрашен азуром с хризоидином. Напоминают полотна импрессионистов

Все фото с объективом 20х/0,4. Все со стекингом (шаг ок. 1 мкм, по 15 - 20 кадров, стекинг в PICOLAY, настройки по умолчанию)

А вот на фиксированных срезах краски совсем блеклые...

Еще один объект: лист алоэ древовидного.

Наверное. есть какой-то "секрет" изготовления срезов этих листьев без заливки в парафин, т.к. в тонких срезах не держится серединка листа. Поэтому на фото только фрагменты срезов.

Фото 1. Объектив 20х, свежий нефиксированный срез. Зеленые хлоропласты присутствуют в достаточно тонком слое клеток.

Фото 2. Объектив 20х, нефиксированный срез, подкрашенный толуидиновым синим. Кутикула и клетки эпидермы (или гиподермы?) приобрели синий (голубой) оттенок, а серединка с проводящими каналами - в фиолетовый.

Фото 3. Объектив 40х. Срез зафиксирован в ФАА. Комбинированная окраска. Краситель № 1 - основной фуксин 0,01% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те. Промывка в 2% уксусной к-те до окончания отхождения облачков краски. Краситель № 2 - анилиновый голубой водорастворимый 0,15% в 2% уксусной к-те. Снова промывка и помещение среза в глицерин. Помещаю под покровное стекло в глицерине, т.к. препарат не высыхает, это удобно. Кутикула и клетки эпидермы окрасились хризоидином в малиновый цвет, ядра эпидермы фуксином в сиреневый, хлоропласты окрасились анилиновым голубым.

Пытался совместить все красители в одном растворе (как у Этцольда), но при добавлении анилинового голубого водорастворимого выпадает осадок.

Вообще удивительно, как вам удается такие тонкие срезы делать без микротома и заливки в плотные среды. У меня никогда так не получается


Красивая микрофотография получилась.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

Сэм-59 а чем Вы делаете срезы?

Ну почему же без микротома? Вот ведь: viewtopic.php?f=6&t=1603, смотрите самый последний пост. Режу опасными бритвами; бритвы и камни для заточки бритв остались от дедов, номеров камней не знаю; правлю на обыкновенном кожаном ремне без пасты ГОИ (паста есть, да ремень в носке ).

Спасибо. К сожалению, фото очень отдаленно передает то, что видно в окуляр, там краше!

Вот еще один препарат: срез корня тапенамбура, окраска сафранином, хризоидином и анилиновым голубым.
Фото 1 - объектив 3,5х, Фото 2 - объектив 9х. С этими объективами приходится свинчивать верхнюю линзу конденсора, при этом интенсивность цветов падает. Сравните с Фото 3 - объектив 20х.

Да, заметно, что цвета не такие.. а освещение по Келеру ? Такое впечатление, что конденсор опущен.
У меня такая же вебка как у вас, только в окулярном исполнении. У них у всех один недостаток существенный - маленький динамический диапазон, поэтому на фото присутствует некоторая "мультяшность", тем не менее, фото замечательные.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

Осветитель ОИ-35. На 20х и выше настройка строго по Келеру. А со свинченной фронтальной линзой конденсора на объективах 9х и 3,5х конденсор немного недоопущен: на выходном окне ОИ-35 у меня приклеена оправа с резьбой для вкручивания поляризационного фильтра, она мешает, надо будет подправить конструкцию... Идея: можно подложить что-то под препарат, чтобы его приподнять... попробую.

Кстати, обнаружил такую вещь. Если настроить освещение под 90х (изображение тела свечения на апертурной диафрагме, в поле зрения резко видна полевая диафрагма, иммерсия на конденсоре), то выходной зрачок объектива заполняется чуть больше чем наполовину (обнаружил, наблюдая в "фазовый телескоп"). Поднимая конденсор относительно этой настройки и увеличивая раскрытие полевой диафрагмы (?!) можно заполнить практически весь выходной зрачок. Так что считать лучшим вариантом настройки освещения: резкое изображений полевой диафрагмы или максимально заполненный зрачок?


Это еще и из-за стекинга.