Sk-m писал(а):
alex_klepnev писал(а):
Возник такой вопрос.
Фотографирую бактерии, мазок, масляная иммерсия. Фокусировка по лайвью. Объектив апохромат 100х1.32 (но в принципе этот эффект наблюдается на всех масляных объективах), прямая проекция на матрицу.
На цветном изображении получается ужасный контраст.Видно, что зеленый в фокусе, красный немного вне, а синий очень сильно вне фокуса. И в результате получается каша в итоговом изображении.
Почему так получается и как с этим бороться.
Очень интересный вопрос, а главное, актуальный. Как ни крути, а вся теория светового микроскопа (которая используется как “правильная и незыблемая” до сегодняшнего времени) построена на аксиоме визуального наблюдения глазами, да ещё и через окуляр. Глаз обладает такими “удобными” особенностями, как аккомодация, конвергенция и проч. Например, аккомодация, повышенная глубина резко “изображаемого” пространства (мозг “дорабатывает”). Плюс, если посмотреть на числовую апертуру окулярных пучков (окуляр как оптический инструмент), она очень небольшая, глубина резкости значительна для “осевых” пучков. Поэтому аберрации для всех типов окуляров для “точки на оси” практически всегда незначительные. То же и для хроматических аберраций лучей вблизи оптической оси – апертура незначительная, глубина резкости достаточная, чтобы не видеть (глазом) хроматику. (Совсем, кстати, другое дело, хроматика внеосевых пучков, угловое поле окуляра, в отличие от углового поля объектива микроскопа – значительно).
А что такое хроматика, по сути, это несовпадение плоскостей для фокусировки лучей для разных спектральных диапазонов. Объективы рассчитываются для зелёной линии 546нм, например, в этом случае, мы говорим, что плоскость изображения (для советского объектива на конечную длину тубуса) будет на расстоянии 147 мм от его опорной плоскости. А для синего (435нм)? А для красного (644 нм)? Совсем в других местах, несовпадение, даже у “продвинутых” апохроматов составляет 5-10мм. Убирая из оптической системы окуляр и глаз наблюдателя, “гоним” это дело на матрицу, как описывает Александр. И вот, пожалуйста, разность положения “цветных” плоскостей изображений “на лице”, точнее, на матрице.
Как с этим бороться? По уму, вся оптика должна быть пересчитана. Также должны быть пересмотрены все теоретические изыскания Аббе и других (они и так “тормознули” лет на 150 оптику светового микроскопа, другое дело, что эти теории оказались слишком удобны в повседневной практике обывателей). Но это “глобально”.
Локально, ставить фильтры (лучше интерференционные), получать изображения “послойно” для каждого цвета (перефокусируя микроскоп), затем накладывать изображения с помощью ПО.
Мы описывали такой способ на одной из конференций:
http://www.labor-microscopes.ru/manager ... apan-2.pdfЕсть другой способ, когда используется ч/б матрица, методом фотометрирования определяется “истинный” цвет объекта, затем с помощью ПО воспроизводится цветное изображение. Это реализовано в ломовских биологических МикроВизорах; хотя, это больше “математические штучки” (субъективное мнение).