EndryПриятно читать текст без грамматических ошибок и с чётким выражением своих мыслей. Это редкость для многих современных студентов
Значит я ошибся, подумав о "студенте-халявщике". Извиняюсь.
К тем, кто честно занимается исследовательской работой, отношусь очень доброжелательно
Значит так...Фитопатологией занимался очень давно и немного. Листья какого растения будете исследовать? Есть ли возможность использовать микротом и заливку в парафин?
Сложность в изготовлении тонких и ровных срезов...Листовые пластинки многих растений очень магкий материал, поэтому наилучшие результаты достигают при изготовлении парафиновых блоков и дальнейшей нарезки материала на микротоме...
Пока предложу Вам предварительные действия по изготовлению временного препарата и проверки действия красителей. Это можно сделать вручную с использованием минимума материалов:
1.
Свежий, поражённый лист следует хорошо промыть от грязи, пылинок, нарезать на части и поместить в фиксатор. Фиксаторов много, но давайте использовать наиболее доступный и хороший: 50% этиловый спирт - 90 мл, ледяная уксусная кислота - 5 мл, 40% формалин - 5 мл.
На дно сосуда с фиксатором лучше положить кусочек фильтровальной бумаги, чтобы кусочки смачивались со всех сторон. Нежелательно, чтобы кусочки листа плавали, лучше их "придавить" фильтровальной бумагой.
В листьях может остаться воздух, поэтому пробирки следует встряхивать (обычно для удаления воздуха из объекта используют вакуумный насос).
В этом фиксаторе листья содержите несколько часов (зависит от размера, плотности, структуры кусочка листа), затем пару раз промываете в 50% этиловом спирте и помещаете объекты в новую порцию 50% этилового спирта.
2. Приготовить блок для резки листовой пластинки. Можно использовать корнеплод моркови, кусочек стиропора (строительный материал), сердцевины бузины и т.п. Кусочек листовой пластинки надо расположить в блоке так, чтобы была возможность сделать поперечный срез. Блок можно аккуратно зажать в каком-нибудь инструменте (тиски, плоскогубцы), предварительно "смягчив" плоскость тисков с помощью приклеенной резины или стиропора, губки и т.п.
3. Резку материала можно проводить обычным опасным лезвием для бритья. Важно делать скользящие плавные движения, чтобы срезы были ровными.
4. Срезы сразу помещаете в 50% этиловый спирт. Отбираете наиболее тонкие срезы, остальные можно выбросить.
5. Далее пробуете окрашивать ткани. Не знаю, как у Вас с красителями. Можно попробовать наиболее доступный - генцианвиолет. Обычно используют 1% спиртовой раствор. Но этот краситель плох при изготовлении постоянных препаратов, так как окраска вымывается при обезвоживании материала растворами спирта.
Можно использовать 1%-й раствор марганцевокислого калия.
Хороший краситель - тионин, его раствор готовят в 3%-м растворе фенола в дистиллированной воде.
Окраска красителями длится от 5 минут до часа. Перед помещением в краситель, срезы можно поместить по очереди в 30%-й этиловый спирт (на 3 минуты), затем в дистиллированную воду. Это если красители водные.
Хорошие результаты могут получиться при комбинированной окраске. В этом случае мицелий хорошо контрастирует с окрашенными тканями. Для комбинированной окраски используют: сафранин, анилиновый синий (1% водные растворы). В сафранине красят минут 5-8, затем срезы помещают в раствор анилинового синего с пикриновой кислотой (насыщенный водный раствор пикриновой кислоты смешивают с раствором анилинового синего- 4:1) и слегка нагревают на пламенем. Затем промывка в дистиллированной воде.
Окрашенный срез промывают несколько раз в дистиллированной воде, помещают на предметное стекло в каплю воды, накрываю покровным стеклом и просматривают при малых и средних увеличениях микроскопа.
Важно подобрать красители и интенсивность окраски.
А изготовление постоянных препаратов - это отдельная тема.
Да, если растение с поражёнными листьями рядом, то рекомендую следующее: свежие листья зажимаете в блоке и нарезаете вручную лезвием, а уже потом помещаете срезы минут на 15-30 в фиксатор.
В каком городе Вы проживаете? Если в городе есть станция защиты растений или с/х ВУЗ, то на кафедрах можно узнать про готовые растворы красителей и др.
Некоторые красители могу подарить (в кристаллическом виде).
Что-то по нарезке материала, изготовлению постоянных препаратов можно посмотреть здесь:
viewtopic.php?f=6&t=1584