Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 23 сен 2021, 05:00

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 28 ]  На страницу 1, 2  След.
Автор Сообщение
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 12:30 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
Здравствуйте любители микромира!
Для практического применения наших аппаратов в вопросах - а что у нас в бутылке, кране, колодце, воде бассейна или пляжа, ведь через воду могут передаваться и паразитозы, и кишечные инфекции — холера, брюшной тиф и паратифы, сальмонеллез, дизентерия, а так же и гепатит А, полиомиелит, лептоспироз, сибирская язва, туляремия, туберкулез, грибковые и др. заболевания.
Профессиональная оценка качества воды формализована, стандартизирована и требует аппаратуры, материалов, навыков помимо микроскопии (для питьевой воды - МУК 4.2.1018-01). Но есть оценочный, хотя и практически применимый, быстрый метод оценки микробиологического качества воды - метод микроскопии мембранных фильтров. Однако, надо помнить - этим методом выявляется меньшее количество бактерий, чем рекомендованными методическими указаниями по санитарно-микробиологическому анализу питьевой воды.

Итак, прямой метод. Удобен тем, что результат, т. е. ориентировочное количество микроорганизмов в 1 мл воды, может быть получен быстро и без специального сложного лабораторного оборудования.
Напоминаю, что все ёмкости, воронка и пр. должно быть по возможности тщательно простерилизовано! Берем 35 мм фильтр мембранный стерильный (продаются поштучно), подготавливаем его вставляя в спецворонку с держателем фильтра на спецколбе в которой лучше создавать некое разряжение для ускорения фильтрации, или можно в обычную воронку сложив фильтр конусом, и медленно (!) фильтруем через него лучше 300мл воды (можно меньшие количества, но тогда менее показательно и верно) так, что бы уровень фильтруемой воды не поднимался в фильтре более чем на 1/5-1/4 высоты фильтрационного конуса (будет зависеть от пористости, материала фильтра, загрязнённости воды и пр.). Это займет некоторое время. Затем окрашиваем конус фильтра с отфильтрованными микроорганизмами эритрозином, высушиваем, отрезаем около 1/3 фильтрационного конуса (через какую часть фильтра фильтровали), помещаем на предметное стекло, предварительно капнув иммерсионного масла на стекло, и на расправляемый по стеклу фильтр (обычно достаточно по капле), который накрываем покровным стеклом. Микроскопируем с иммерсионным объективом, применяя сетчатый микрометр разделенный на мелкие квадраты. Подсчитываем микроорганизмы в 20 полях зрения - в каждом поле зрения в 4 маленьких квадратах расположенных по диагонали.
Рассчитываем число бактерий в 1мл х=(S*N*10 в 6 степени)/(s/V)
Изображение
где: S –фильтрующая площадь (мм2, измерить после помещения под покровное стекло);
N – среднее количество бактерий в одном квадрате;
10 в степени 6 – переводной коэффициент квадратных миллиметров в квадратные микрометры;
s – площадь квадрата окулярного микрометра, мкм2.
V– объем профильтрованной жидкости, мл.

У вас получилось более х=100 или более? Тогда стоит задуматься о оплате полного анализа в спецлаборатории, и смене или очистке Вашего источника воды.

P.S. Уважаемые специалисты! Я знаю что описанный мной здесь метод весьма субъективен (зависит от качества аппаратуры и квалификации исследователя), и не в достаточной степени достоверен для однозначного вывода и оценки. И я знаю что такое и как применять фильтровальный прибор Зейтца и воронка Гольдмана, т.к. имею спецобразование и опыт работы в биолабораториях. Но ориентируясь на квалификацию и оснащенность обычных людей описал метод именно так. С удовольствием приму и учту Вашу конструктивную критику и Ваши предложения и дополнения.

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Последний раз редактировалось PCPshnik 11 апр 2021, 12:38, всего редактировалось 1 раз.

Вернуться к началу
 Профиль  
 

СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 12:35 
Не в сети

Зарегистрирован: 31 май 2013, 15:16
Сообщения: 2133
Откуда: Мончегорск
Если у меня инфузории из крана лезут.... то никакие расчеты не нужны, итак все очевидно.....


Ваш расчет я так понимаю это адаптация метода подсчета в камере Горяева только адаптированный под высушивание и окраску образца, а не на живую.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
МБИ-3 (АУ-12 ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 12:47 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
Mildi писал(а):
Если у меня инфузории из крана лезут.... то никакие расчеты не нужны, итак все очевидно.....
Ваш расчет я так понимаю это адаптация метода подсчета в камере Горяева только адаптированный под высушивание и окраску образца, а не на живую.

Метод не мой, "...всё придумано до нас." Но общем-то, да. В степях Калмыкии и горах Кавказа проблематично было найти стерилизаторы и термостаты для диф.культивирования. А вот источник воды нужен. А сейчас весьма актуально для дачных колодцев, старых трубопроводов и т.п.

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 12:59 
Не в сети

Зарегистрирован: 27 ноя 2018, 15:05
Сообщения: 576
-


Последний раз редактировалось uldima 02 авг 2021, 21:06, всего редактировалось 1 раз.

Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 13:31 
Не в сети

Зарегистрирован: 19 авг 2020, 04:33
Сообщения: 833
Откуда: Киев
PCPshnik писал(а):
а что у нас в бутылке, кране, колодце, воде бассейна или пляжа, ведь через воду могут передаваться и паразитозы, и кишечные инфекции — холера, брюшной тиф и паратифы, сальмонеллез, дизентерия, а так же и гепатит А, полиомиелит, лептоспироз, сибирская язва, туляремия, туберкулез, грибковые и др. заболевания.

просто не пейте сырой воды, а кипятите
uldima писал(а):
Это не Америка чтоб нормы соблюдать.

америка прям свет в окне https://www.youtube.com/watch?v=4LBjSXWQRV8


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 13:34 
Не в сети

Зарегистрирован: 31 май 2013, 15:16
Сообщения: 2133
Откуда: Мончегорск
На самом деле у них как правило не лучше... без фильтра у них бывает даже хуже. Прост у них работает принцип меньше знаешь, крепче спишь.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
МБИ-3 (АУ-12 ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 13:57 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
Кстати, окрашивать можно не только эритрозином, но и метиленовым синим или фуксином в течение двух минут, у кого что найдётся. Фильтр можно применить и большего размера, но он дороже, и ограничить на нем место фильтрации так, что бы оно потом поместилось на предметное стекло будет сложнее.
ЗЫ. Фильтровальная бумага не подходит! Совсем. Никакая. Т.к. даже у самой мелкопористой -"фиолетовая лента " огромная толщина и плотность для такого исследования.

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 14:11 
Не в сети

Зарегистрирован: 31 май 2013, 15:16
Сообщения: 2133
Откуда: Мончегорск
А на живую окрасить их возможно, чтоб в камеру Горяева зарядить? Тогда все становится вообще просто с подсчетом.

Ну или допустим как то взять каплю маленькую известного объема резко осушить, зафиксировать, окрасить и посчитать.

_________________
Мой зоопарк:
Биолам (АУ-12 КОН-3)
МБИ-3 (АУ-12 ОИ-14)
Люмам-И1 (АУ-26 МФН-11 КФ-4)
МБИ-15 (ПК-3, без План-Апо)
Carl Zeiss Amplival
Микмед 2 вар. 2
PZO DIC, МФА, 3D Gamma
and etc


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 15:29 
Не в сети

Зарегистрирован: 19 авг 2020, 04:33
Сообщения: 833
Откуда: Киев
PCPshnik писал(а):
ЗЫ. Фильтровальная бумага не подходит! Совсем. Никакая. Т.к. даже у самой мелкопористой -"фиолетовая лента " огромная толщина и плотность для такого исследования.

Можно поиграться с керамическими бактериальными фильтрами - пропустить через него известный объем воды, а потом набрать на анализ тот концентрат который останется в нем. Единственное что медленно фильтрация происходит.
Они разных размеров бывают http://chemistry-chemists.com/N2_2012/U3/filtr-2.jpg


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 16:28 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
Mildi писал(а):
А на живую окрасить их возможно, чтоб в камеру Горяева зарядить? Тогда все становится вообще просто с подсчетом. Ну или допустим как то взять каплю маленькую известного объема резко осушить, зафиксировать, окрасить и посчитать.

В принципе возможно. Но! Что бы получить столь маленькую каплю ФИКСИРОВАННОГО ТОЧНОГО объёма, что бы зарядить в счётную камеру нужен микродозатор, а это штука специфическая, недешёвая и хрупкая. Причем сначала бактерий нужно сконцентрировать, из большого объема воды. В описанном мной методе обходимся мембранным фильтром стоящим в розницу не более 50р (а часто и меньше), а для "маленькой капли" воду сначала надо центрифугировать 2500-5000 оборотов некоторое время, потом убрать надостадочную жидкость, а сам осадок, ВЕСЬ что получился, уже перевести в каплю известного объема. То есть нужна центрифуга с расходными пробирками+растворители, и микродозатор с расходными наконечниками, а т.к. микроскопировать надо под иммерсией то это ещё покровное стекло для счетной камеры + геморрой с её последующей отмывкой. Не для каждого дома такое возможно.

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 16:32 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
proton писал(а):
PCPshnik писал(а):
ЗЫ. Фильтровальная бумага не подходит! Совсем. Никакая. Т.к. даже у самой мелкопористой -"фиолетовая лента " огромная толщина и плотность для такого исследования.

Можно поиграться с керамическими бактериальными фильтрами - пропустить через него известный объем воды, а потом набрать на анализ тот концентрат который останется в нем. Единственное что медленно фильтрация происходит.
Они разных размеров бывают http://chemistry-chemists.com/N2_2012/U3/filtr-2.jpg

Проблема потом "смыть" с такого фильтра бактерии, причем нужно ВСЕХ, а они прилипают наглухо. Делают и так, но потом микроскопируют сам фильтр под люминесценцией, предварительно окрасив флюорохромами "налипшее".

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 16:40 
Не в сети

Зарегистрирован: 19 авг 2020, 04:33
Сообщения: 833
Откуда: Киев
PCPshnik писал(а):
Проблема потом "смыть" с такого фильтра бактерии, причем нужно ВСЕХ, а они прилипают наглухо.

Что то в растворе да останется особенно если биопленку на стенке поскоблить слегка.
PCPshnik писал(а):
Делают и так, но потом микроскопируют сам фильтр под люминесценцией, предварительно окрасив флюорохромами "налипшее".

Вы фотографию смотрели? Как вы его собрались микроскопировать если всё внутри?


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 16:53 
Не в сети

Зарегистрирован: 08 мар 2021, 14:05
Сообщения: 97
Откуда: Краснодар
proton писал(а):
Что то в растворе да останется особенно если биопленку на стенке поскоблить слегка.

"Поскоблить слегка" не выйдет, надо всё что на нем останется, как можно более полно. Иначе никакой оценки не может быть.

proton писал(а):
Вы фотографию смотрели? Как вы его собрались микроскопировать если всё внутри?

Они разные бывают, бактериальные фильтры. Я не имел ввиду именно этот. Есть специальные. И для микроскопии в т.ч. Но обычно подобные, как с фото, для очистки используют, что бы отделить бактерии от среды без стерилизации. На биопроизводствах, обычно.

_________________
МЛ-3. Биолам И. Ветеринария, иммунология. Герпетология.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 17:44 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 29 сен 2020, 22:57
Сообщения: 142
Откуда: Город на Неве
Я бы как вариант копнул в сторону шприцевых фильтров.

_________________
Люмам Р-8 (КФ-4, ОИ-13, ОИ-14, АУ-26), Микмед-6 вар. 74, МББ-1


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 11 апр 2021, 18:02 
Не в сети

Зарегистрирован: 19 авг 2020, 04:33
Сообщения: 833
Откуда: Киев
PCPshnik писал(а):
proton писал(а):
Что то в растворе да останется особенно если биопленку на стенке поскоблить слегка.

"Поскоблить слегка" не выйдет, надо всё что на нем останется, как можно более полно. Иначе никакой оценки не может быть.
Есть анализ качественный, а есть количественный - для качественного вполне подойдет.
proton писал(а):
Вы фотографию смотрели? Как вы его собрались микроскопировать если всё внутри?

Они разные бывают, бактериальные фильтры. Я не имел ввиду именно этот. Есть специальные. И для микроскопии в т.ч. Но обычно подобные, как с фото, для очистки используют, что бы отделить бактерии от среды без стерилизации. На биопроизводствах, обычно.

Он керамический стерилизацию вполне выдерживает, на производстве не знаю, а в обычной лаборатории вполне себе присутствуют они.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 28 ]  На страницу 1, 2  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 22


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
cron
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика