Астрономия и микроскопия
http://forum.shvedun.ru/

Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=5534		 Страница 1 из 3
Автор:  adam [ 13 июн 2017, 15:25 ]
Заголовок сообщения:  Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Актуальная тема для многих, я полагаю: реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Пусть каждый делится опытом на пользу всех.
Лично я рекомендую отличный сервис: AntrazoXrom
В наличии есть базовые реактивы для микроскопии - соли металлов какие угодно( для протравных красителей без них никуда), формалин, сами красители( есть и гематоксилин в сухом виде), лабораторная посуда и т.д. И по смешным ценам.
Более того, помогут приобрести нужные реактивы, которых нет в списке. Как пример: понадобился мне Альциановый синий( фото у Актиса - отличный краситель, дающий насыщенный голубой цвет неодревесневших клеток, для выявления слизей и мукополисахаридов без него также никуда.) Так вот в одной из фирм с меня запросили 200 евро :shock: :D за 5 грамм Альцианового синего и под заказ. На AntrazoXrom мне нашли Альциановый синий( из старых запасов) 25 грамм упаковка и 1500 российских рублей.
Разница большая, правда? :) Пришёл сам краситель - в немецкой упаковке( с надписью для микроскопии). Так что - рекомендую.
Автор:  Solar [ 16 июн 2017, 07:48 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Подскажите, пожалуйста, про камеру Горяева. Есть 2-х сеточные и 4-х сеточные - в чем разница при использовании? И зачем больше одной сетки?
Автор:  lecter [ 16 июн 2017, 09:45 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
В одной камере эритроциты, во второй лейкоциты считаются. Четырехсеточная чтобы от 2 пациентов подсчет провести.
Автор:  Microbia [ 16 июн 2017, 13:16 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Буду благодарна, если кто-то подскажет где купить толуидиновый синий. Или другой краситель для окраски хромосом.
Сварить ацетокармин не предлагать, с этим я не справлюсь :-)
Автор:  Solar [ 16 июн 2017, 14:09 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
lecter, спасибо.

Microbia писал(а):
Буду благодарна, если кто-то подскажет где купить толуидиновый синий. Или другой краситель для окраски хромосом.
Сварить ацетокармин не предлагать, с этим я не справлюсь :-)

xummag.ru

Покупал у них красители и реактивы. Если чего-то нет в каталоге, то можно спросить - может оказаться в наличии (я что-то так и купил).
Автор:  Microbia [ 16 июн 2017, 14:10 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Solar, спасибо, я попробую.
Автор:  adam [ 16 июн 2017, 16:02 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Microbia писал(а):
Буду благодарна, если кто-то подскажет где купить толуидиновый синий. Или другой краситель для окраски хромосом.
Сварить ацетокармин не предлагать, с этим я не справлюсь :-)

Ув. Microbia, при окраске хромосом, обратите внимание на протокол фиксации материала, сам материал должен быть абсолютно свежим, взятым от живых объектов, желательно обработанным колхицином( задерживает деление до метафазной пластинки), лучший фиксатор - фиксатор Карнуа. Или найдите сами фиксаторы для цитологических исследований. Всё-таки толуидиновый синий - не лучший краситель для окраски хромосом :) , в основном он применяется для окраски нервной ткани. так что без ацетокармина, ацетоорсеина или ацетолакмоида( окрашивает хуже, но применяется, т.е. без варки кармина, орсеина и лакмоида с 40 процентной уксусной кислотой Вам никак не обойтись :D , найдите химика, который Вам всё это сварит, но данные красители окрашивают ядерные компоненты великолепно. Я сам постоянно пользуюсь квасцовым кармином и борным кармином для окраски планктона - насыщенная, яркая окраска! Сухой кармин по ссылке выше - был в наличии. Успехов! Посмотрите ещё Ромейса - все варианты окрасок, самых экзотических есть, может и найдёте замену ацетокармину.
Автор:  Microbia [ 16 июн 2017, 18:59 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
adam, спасибо за подробный ответ. Очень это все сложно конечно. Буду пробовать.
Автор:  adam [ 18 июн 2017, 14:16 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Microbia писал(а):
adam, спасибо за подробный ответ. Очень это все сложно конечно. Буду пробовать.

Ничего сложного нету :D , вот один из самых простых способов окраски хромосом, методические указания биофака МГУ:
Цитата:
Для проведения цитогенетического мониторинга обычно используются метафазные хромосомы митотически делящихся клеток. Мы брали меристемы различных тканей: проростков семян, пазухи листьев, усиков, тапетума пыльников цветущих растений, а также эмбриональных тканей зародышей незрелых семян. Из культурных растений нами использовался горох посевной, различные виды лука, фасоли. Для дикорастущих видов хорошие результаты получены на семенах кульбабы осенней и различных видов креписа. У животных объектов мы использовали политенные хромосомы слюнных желёз личинок дрозофилы, сосущих мошек (семейство симулид), а также личинок хирономид, жаберный эпителий рыб, дробящуюся икру лягушек. Для оценки мейоза фиксировали семенники саранчи и кузнечиков, пыльники вышеперечисленных растений.

Фиксация материала

Фиксацию проводили в пенициллиновых пузырьках в ацетоуксусном фиксаторе (3 части 96% спирта : 1 часть ледяной уксусной кислоты). В этом фиксаторе в холодильнике можно сохранять материал в течении длительного времени. Материал окрашивали в 2% р-ре ацетокармина. Растительные ткани предварительно мацерировали в 3-нормальной соляной кислоте при комнатной температуре не более 15 мин, с последующим 5-минутным промыванием водой. Для окрашивания объекты оставляли на ночь в холодильнике. При использовании экспресс-метода окрашивание и мацерацию можно проводить одновременно, нагревая объекты в красителе на кипящей водяной бане 10 мин. Объекты животного происхождения могут быть окрашены также, как и растительные 2% ацетокармином либо 2% ацетоорсенином при комнатной температуре в течение 30 мин. Для лучшего прокрашивания размер объектов не должен превышать 1-2 мм.

Приготовление препаратов.

В условиях летней практики использовали известную технику временных давленных препаратов, для окантовки препаратов применяли лак для ногтей.

Объём выборки.

Для цитогенетического мониторинга популяции обычно брали 5-10 растений. На цитологических препаратах с каждого растения анализировали по 10 клеток в метафазе и 1000 клеток в интерфазе.
-http://herba.msu.ru/russian/biostantion/tezis/54.html
Толуидиновый синий, равно как и любые другие базофильные( ядерные красители) видимо и однозначно окрасят только чистые хромосомы, но для их выделения потребуется культивирование лимфоцитов и лейкоцитов в стерильной питательной среде в термостате и последующая сложная обработка. Один из вариантов данного метода уже приводил Юрий, вот пожалуйста-Микрометод культивирования лимфоцитов цельной крови для хромосомного анализа по Аракаки.
Автор:  Базилио [ 25 мар 2021, 19:42 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
adam писал(а):
Microbia писал(а):
для окантовки препаратов применяли лак для ногтей.

То есть чертят границы вокруг препарата кисточкой с лаком для ногтей и клеят на это все покровное стекло с легким нажимом ? В общем то просто, а то я про какие то воски до этого слышал, думал вообще клей использовать... Или я не правильно понял суть процесса ?
Автор:  Solar [ 28 мар 2021, 16:49 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Когда объект уже заключен в среду под покровным стеклом, по периметру кисточкой наносят окантовывающий состав, чтобы изолировать от внешней среды. Окантовка еще помогает заметить, что вышли за пределы покровного стекла при перемещении препарата. Для последнего делают непрозрачную окантовку.

Техника типа "уголком покровного стекла по воску, чтобы сделать ножку..." - это совсем другое и не относится к окантовке.
Автор:  Базилио [ 28 мар 2021, 18:47 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Solar писал(а):
Техника типа "уголком покровного стекла по воску, чтобы сделать ножку..." - это совсем другое и не относится к окантовке.

Спасибо, а ножкой всегда поднимают покровное над предметным и делают это на глаз, надавливая до упора нежно ?
Автор:  Solar [ 29 мар 2021, 00:34 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Ножки нужны в очень редких случаях.
Автор:  Solar [ 07 дек 2021, 01:16 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Итоги двухлетнего эксперимента :)
В общем решил я в далеком 2019 году проверить, насколько надежно можно хранить растворители в сосуде с притертой пробкой из комплекта Микмед-2. Дополнительную притирку не делал. Как изготовили на производстве, так и проверял. Сосуд находился при комнатной температуре. Нумерация меток начинается с верхней.

Спирт этиловый 95%.
30.11.2019 - 1-я метка (наполнил спиртом).
24.01.2020 - 1-я метка.
08.02.2020 - 1-я метка.
25.08.2020 - 1-я метка. (подложил зубочистку под пробку).
31.08.2020 - 2-я метка.
20.09.2020 - 3-я метка.
10.10.2020 - 4-я метка.
Вложение:
Этиловый спирт.jpg
Этиловый спирт.jpg [ 221.85 КБ | Просмотров: 4861 ]

Как видно, с закрытой пробкой уровень не изменился за 9 мес. Решил проверить, что будет если приоткрыть.

Петролейный эфир 70/100.
10.10.2020 - 1-я метка (наполнил петролейным эфиром).
14.11.2020 - 1-я метка.
04.12.2021 - 2-я метка.
Вложение:
Петролейный эфир.jpg
Петролейный эфир.jpg [ 124.67 КБ | Просмотров: 4861 ]

За один месяц не было заметно снижения уровня. Но далее стало видно, что петролейный эфир испаряется.

За 14 мес. испарилось 8 мл петролейного эфира (измерения проводились пипеткой 2-1-2-1 по ГОСТ 29227-91). Петролейный эфир является смесью пентана и гексана. Для обоих веществ установлена ПДК в воздухе рабочей зоны 300 мг/м3 (ГОСТ 12.1.005-88). При плотности петролейного эфира 0,695 г/см3 (Фрайштат Д.М. Реактивы и препараты для микроскопии. Справочник. 1980) получаем, что для превышения ПДК объем помещения должен быть меньше 19 м3, если помещение герметично и не вскрывалось.

В целом результаты удовлетворительные. В таком сосуде можно хранить петролейный эфир или этиловый спирт (оба вещества 4 класса опасности). Но для более опасных летучих веществ, например для ксилола (3 класс опасности), лучше выбрать более надежную тару.
Автор:  proton [ 12 дек 2021, 04:44 ]
Заголовок сообщения:  Re: Реактивы и расходные материалы для микроскопии.
Solar писал(а):
Для обоих веществ установлена ПДК в воздухе рабочей зоны 300 мг/м3 (ГОСТ 12.1.005-88).

Для воздуха населенных пунктов т.е. если дома хранить, для пентана максимальная разовая (ПДК м.р.) - 100 мг/м3, а среднесуточная (ПДК с.с.) - 25 мг/м3, для гексана максимальная разовая (ПДК м.р.) - 60 мг/м3.
https://gklab.ru/chemicals/pentan/
https://gklab.ru/chemicals/geksan/
https://studref.com/303905/tehnika/toks ... evodorodov
последний источник ссылается на:
Цитата:
64. Вредные вещества в промышленности / Под ред. Г.Н. Левиной, Н.В. Лазарева.-М.: Госхимнздат, 1963.Т. 2. 624 с.
65. Вредные химические вещества /Под ред. В.А. Филова.-Л.: Химия, 1990.732 с.
66. Вредные вещества в промышленности / Под ред. Н.В. Лазарева.-М.: Госхимнздат, 1976. 4.1 и II.


ПДК м.р. - предельно допустимая максимальная разовая концен­трация химического вещества в воздухе населённых мест, не вызы­вающая вредных последствий для здоровья человека при вдыхании в течение 30 мин. Измеряется в мг/м3.

ПДК с.с. - предельно допустимая среднесуточная концентрация химического вещества в воздухе населенных мест, не вызывающая вредных последствий, для здоровья человека при неопределенно долгом времени вдыхания. Измеряется в мг/м3.
Страница 1 из 3 Часовой пояс: UTC + 3 часа
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group
https://www.phpbb.com/