Alex писал(а):
Каким посоветуете красить красителем кислоустойчивых бактерий.
в основном используют метод окраски по Цилю-Нильсену.
Окраска кислото- и спиртоустойчивых микробов.
Карболовый фуксин Циля:
основного фуксина 1 г, 96° спирта 10 мл, кристаллической карболовой кислоты 5 г, дистиллированной воды 100 мл. Готовят, как описано для генцианвиолета, растиранием в ступке.
Другой метод приготовления.
Берут 10 мл насыщенного (10%) спиртового раствора основного фуксина, 100 мл 5% раствора карболовой кислоты. Этот краситель в чистом виде употребляется только для окраски кислото- и спиртоустойчивых бактерий и спор. Для обычной окраски пользуются разведенным фуксином: фуксина Циля 1 мл, дистиллированной воды 9 мл.
Окрашивают препарат 1/2—1 минуту.
Готовят ex tempore, так как он быстро портится.
Окраска по Цилю — Нильсену — наиболее употребительный метод окраски микобактерий туберкулеза. На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги, не превышающий по размерам предметное стекло; наливают фуксин Циля и осторожно нагребают на горелке до отхождения паров, после чего оставляют краситель, пока препарат несколько остынет. Снимают бумагу с фуксином, ополаскивают препарат водой, опускают препарат в стаканчик с 5% раствором серной кислоты или смесью 10 частей спирта и 1 части соляной кислоты, прополаскивают до обесцвечивания. Тщательно промывают водой. Докрашивают любым раствором метиленового синего в течение 3—5 минут. Мазок, окрашенный по Цилю — Нильсену, вместо докраски метиленовым синим можно протравливать насыщенным раствором пикриновой кислоты (по Шпенглеру).
Кислото- и спиртоустойчивые палочки принимают красный цвет, все остальные микробы — синий.
Окраска по Семеновичу — Марциновскому.
Мазок красить 2 минуты разведенным (1:3) карболовым фуксином Циля. Затем промыть водой и 3—5 минут красить синькой Леффлера. Вновь промыть водой и сушить.
Окраска по Баумгартену.
Красить без подогревания а растворе фуксина (5 капель насыщенного спиртового раствора фуксина и 5 мл дистиллированной воды) в течение 5—7 минут. Затем обесцветить в смеси 10 частей спирта и 1 части соляной кислоты (15 секунд), промыть водой и докрасить разведенным метиленовым синим.
Оба метода (Семеновича — Марциновского и Баумгартена) применимы для отличия лепрозных палочек, окрашивающихся при этом, от туберкулезных, не окрашивающихся.
Окраска по Бунге — Траутенроту.
Препарат для извлечения жира на 3 часа кладут в абсолютный спирт и на 15 минут в хромовую кислоту, промывают водой и красят при подогревании карболфуксином. После 3-минутного обесцвечивания разведенной серной кислотой докрашивают насыщенным спиртовым раствором метиленового синего 5 минут.
Применяют для дифференциации туберкулезных микобактерий (окрашиваются в красный цвет) от палочек смегмы (окрашиваются в синий цвет).
Окраска по Муху.
В смеси 10 мл насыщенного спиртового раствора метилвиолета и 100 мл 2% водного раствора карболовой кислоты препарат выдерживают сутки. Затем его 1—2 минуты обрабатывают раствором Люголя, 1 минуту — 5% раствором азотной кислоты и 10 секунд—3% раствором соляной кислоты. После дифференцирования в смеси, состоящей из равных объемов спирта и ацетона, до прекращения отхождения краски промывают водой, докрашивают фуксином Пфейффера, вновь промывают водой и высушивают.
Окраска по Козлову.
Красят 45 минут в смеси: 1 г генцианвиолета, 6 г карболовой кислоты, 40 мл глицерина и 100 мл дистиллированной воды. Генцианвиолет и карболовую кислоту предварительно растирают в ступке, после чего прибавляют глицерин и дистиллированную воду. Перед употреблением краску разводят 3 частями дистиллированной воды и фильтруют.
После промывания препарата водой его 20 секунд обрабатывают раствором Люголя, промывают водой, 2—3 секунды окрашивают 0,1% раствором сафранина, вновь промывают водой и сушат. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
Оба метода применяют для выявления зернистой формы туберкулезных микобактерий (зерен Муха).
Вход
Регистрация
FAQ
Поиск
Для окраски бактерий приготовите 0,2% раствор. Правда, это будет водный раствор...