Астрономия и микроскопия :: Просмотр темы

Microbiologist писал(а):

Вот эта книга: А.А. Кудрявцева, Л.А. Кудрявцева, Т.И.Привольцева - Гематология животных и рыб.

Спасибо. Скачал книгу, посмотрел - пригодится. Только вот азур-эозин там опять-таки в метаноле с глицерином

adam писал(а):

если Вы метанол замените на этанол( оба алифатические спирты из одного ряда), а в остальном внимательно читайте пособия!

Сдается мне, что сами эти спирты как таковые равнозначны в качестве растворителя для краски (да и фиксатора тоже). Вопрос скорее в содержании воды. Наверное, поэтому метанол во всех прописях. И если уж использовать этанол - то абсолютный, что тоже бе :evil:

Ромейс в конце пункта 1359 писал(а):

Глицерин должен иметь уд. вес 1,26 и содержать лишь 1,5% воды. Осцовной раствор нужно очень хорошо закрывать, так как и испарение метилового спирта и восприятие воды глицерином приводят к выпадению красителя. Герметически закрытый раствор сохраняется неограниченно долго.

Это... Тут такое дело... Вобщем есть кило фенола... Только не "игольчатые кристаллы", как обычно пишут во всяких литературах, а сплошная глыба фенольного льда, застывшего в стеклянной бутылке. Как лучше отвесить несколько грамм? Колоть лед пока не решился - как-то опасно в стеклянной таре, мне кажется. Может растопить и отлить нужный вес (как это лучше сделать - тоже вопрос)? Вообще ожидал получить в сыпучем виде. А тут вот как. Вобщем прошу методической поддержки. Как лучше взвесить? И желательно не устроить геноцид в масштабе муниципального образования :roll:

Решил сам приготовить раствор генцианового фиолетового. Отвесил 1 г и растворил в 10 мл спирта, добавил 90 мл карболовой кислоты 5% (тоже сам сделал). Встяхивал/взбалтывал/перемешивал и т.п. Ну значит думаю - дело за малым - профильтровать и готово. И тут блин засада. Взял фильтр "черная лента" и... по капле за 3-5 секунд... Ожидал, что будет побыстрее (мягко говоря). Это нормально? Фильтр - круг d=7 см, воронка d=3,5 см.

Вобщем нафильтровал 50 мл примерно часа за полтора. Нормально ли, что на поверхности фильтрованного раствора есть нечто вроде пленочки с металлическим блеском (как у кристаллов генцианового фиолетового) или плохо отфильтровал? :lol:

Еще возник вопрос. По прописям некоторые водные растворы (например, нейтральный красный или хризоидин) нужно растворить в кипятке и фильтровать горячими... Хм... С такой скоростью фильтрации... :roll:

Да, я встречал сведения о том, что генциановый фиолетовый устойчив в спиртовом растворе (как и большинство других красителей). Но сделал в 5% карболовой кислоте, потому что так прописано в методе окраски бактерий по Граму. Тем более, что окраска по Граму может дать недостоверный результат и зависит также от возраста культуры и многого другого. Поэтому решил в точности придерживаться прописи. Буду признателен за совет, как приготовить устойчивый и долго хранящийся раствор, который можно использовать для определения Грам+/-. Кстати, как делают готовые растворы, которые закупают мед. лаборатории?

Еще возник вопрос про анатомическую окраску растений по методу Этцольда. Почитал книгу - Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. И где-то на форуме об этом методе писал Aktis. Так как не могу сделать мизерные навески красителей, то поступил следующим образом. Развел 1 г фуксина основного в 100 мл уксусной кислоты 2% - взял 1 мл этого раствора в другую баночку. Также 1 г сафранина в 100 мл уксуса 2% - взял 4 мл. Затем анилинового синего водорастворимого (он же водный синий) - 10 мл раствора. Добавил 85 мл уксусной кислоты 2% в баночку с тремя красителями и получил 100 мл краски Этцольда. И... профильтровал... Да так профильтровал, что весь анилиновый синий отфильтровался... :shock:

Вобщем из раствора вишневого цвета получил розовый фильтрат - этот самый синий напроч исчез. Вот и как сделать краску Этцольда :roll:

Фильтровал через "черную ленту" не обеззоленную. Кстати, делал отдельный водный раствор анилинового синего - нормально профильтровался, почти без осадка на фильтре.

Еще возник вопрос про анатомическую окраску растений по методу Этцольда. Почитал книгу - Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. И где-то на форуме об этом методе писал Aktis. Так как не могу сделать мизерные навески красителей, то поступил следующим образом. Развел 1 г фуксина основного в 100 мл уксусной кислоты 2% - взял 1 мл этого раствора в другую баночку. Также 1 г сафранина в 100 мл уксуса 2% - взял 4 мл. Затем анилинового синего водорастворимого (он же водный синий) - 10 мл раствора. Добавил 85 мл уксусной кислоты 2% в баночку с тремя красителями и получил 100 мл краски Этцольда. И... профильтровал... Да так профильтровал, что весь анилиновый синий отфильтровался... :shock:

Комбинированная окраска по Этцольду
(Etzold, 1983)
Для различения одревесневших и неодревесневших оболочек
готовят смесь трех красителей в 2%-й уксусной кислоте: основ
ной фуксин в разведении 1:10000, сафранин в разведении 1:2500,
водный синий в разведении 1:1000. Красят прогрессивным спосо¬
бом. Неодревесневшие оболочки окрашиваются в голубой цвет,
одревесневшие — в различные оттенки красного. Смесь красите¬
лей проста в употреблении и может долго храниться.

Для комбинированной окраски известен также похожий со¬
став (Krauter, 1985): 10 мг основного фуксина, 40 мг сафранина,
150 мг астраблау, 100 мл воды, 2 мл ледяной уксусной кислоты.
Неодревесневшие оболочки окрашиваются в синий цвет, одре¬
весневшие — в красный, ядра — в розовый. Особенно хорошо эта
окраска удается после фиксаторов, содержащих уксусную кислоту.

Автор:	adam [ 26 апр 2017, 10:46 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Solar писал(а): Microbiologist писал(а): Вот эта книга: А.А. Кудрявцева, Л.А. Кудрявцева, Т.И.Привольцева - Гематология животных и рыб. Спасибо. Скачал книгу, посмотрел - пригодится. Только вот азур-эозин там опять-таки в метаноле с глицерином adam писал(а): если Вы метанол замените на этанол( оба алифатические спирты из одного ряда), а в остальном внимательно читайте пособия! Сдается мне, что сами эти спирты как таковые равнозначны в качестве растворителя для краски (да и фиксатора тоже). Вопрос скорее в содержании воды. Наверное, поэтому метанол во всех прописях. И если уж использовать этанол - то абсолютный, что тоже бе Ромейс в конце пункта 1359 писал(а): Глицерин должен иметь уд. вес 1,26 и содержать лишь 1,5% воды. Осцовной раствор нужно очень хорошо закрывать, так как и испарение метилового спирта и восприятие воды глицерином приводят к выпадению красителя. Герметически закрытый раствор сохраняется неограниченно долго. Для многих красителей ( водо-и спирторастворимых)- концентрация спирта - не имеет особого значения, маточный раствор сафранина я, к примеру готовлю на 50 процентном спирте, а вот растворы фуксина, эозина требуют 70-80 процентной концентрации, иначе, они в водных растворах выпадают в осадок, но, это дело опыта.

Автор:	Solar [ 26 апр 2017, 13:21 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Видимо, придется экспериментировать.

Автор:	Solar [ 03 июн 2017, 11:51 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Это... Тут такое дело... Вобщем есть кило фенола... Только не "игольчатые кристаллы", как обычно пишут во всяких литературах, а сплошная глыба фенольного льда, застывшего в стеклянной бутылке. Как лучше отвесить несколько грамм? Колоть лед пока не решился - как-то опасно в стеклянной таре, мне кажется. Может растопить и отлить нужный вес (как это лучше сделать - тоже вопрос)? Вообще ожидал получить в сыпучем виде. А тут вот как. Вобщем прошу методической поддержки. Как лучше взвесить? И желательно не устроить геноцид в масштабе муниципального образования

Автор:	lecter [ 03 июн 2017, 12:15 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Та же проблема была. Накрыть горло марлей или салфеткой (отлетают кристаллики), и проткнув её длинным ножом потихоньку ковырять, именно как лёд, большое усилие не прикладывать. Если плавить - задохнешься, только на открытом воздухе.

Автор:	Solar [ 03 июн 2017, 12:27 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Заточу отвертку. Если что, не поминайте лихом

Астрономия и микроскопия http://forum.shvedun.ru/

Подкажите по красителям http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=2489	Страница 5 из 7

Автор:	adam [ 03 июн 2017, 12:47 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Solar писал(а): Это... Тут такое дело... Вобщем есть кило фенола... Только не "игольчатые кристаллы", как обычно пишут во всяких литературах, а сплошная глыба фенольного льда, застывшего в стеклянной бутылке. Как лучше отвесить несколько грамм? Колоть лед пока не решился - как-то опасно в стеклянной таре, мне кажется. Может растопить и отлить нужный вес (как это лучше сделать - тоже вопрос)? Вообще ожидал получить в сыпучем виде. А тут вот как. Вобщем прошу методической поддержки. Как лучше взвесить? И желательно не устроить геноцид в масштабе муниципального образования Фенол - гигроскопичен, поэтому неудивительно, что он застыл в глыбу льда. Очень аккуратно попробуйте отколоть нужное Вам количество, единственно с перчатками и очками, ожоги от фенола не заживают очень долго. Именно отколоть, растапливание - реальный случай: капля расплавленного фенола попала на кожу, итог -ожог до кости. ----------------- Кстати, неслучайно фенол используется в молекулярной биологии и генноинженерных манипуляциях в процессе выделения ДНК из проб: фенол вызывает полную деструкцию белковых компонентов, что облегчает выделение чистой ДНК.

Автор:	Solar [ 03 июн 2017, 14:32 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
lecter, adam, спасибо за советы и предостережения.

Автор:	alex_klepnev [ 05 июн 2017, 09:43 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Я нагревал фенол в закрытой бутылке в термостате (можно на водяной бане), а потом отливал нужное количество. Из бутылки это очень удобно.

Автор:	Solar [ 13 июл 2017, 15:53 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Решил сам приготовить раствор генцианового фиолетового. Отвесил 1 г и растворил в 10 мл спирта, добавил 90 мл карболовой кислоты 5% (тоже сам сделал). Встяхивал/взбалтывал/перемешивал и т.п. Ну значит думаю - дело за малым - профильтровать и готово. И тут блин засада. Взял фильтр "черная лента" и... по капле за 3-5 секунд... Ожидал, что будет побыстрее (мягко говоря). Это нормально? Фильтр - круг d=7 см, воронка d=3,5 см. Вобщем нафильтровал 50 мл примерно часа за полтора. Нормально ли, что на поверхности фильтрованного раствора есть нечто вроде пленочки с металлическим блеском (как у кристаллов генцианового фиолетового) или плохо отфильтровал? Еще возник вопрос. По прописям некоторые водные растворы (например, нейтральный красный или хризоидин) нужно растворить в кипятке и фильтровать горячими... Хм... С такой скоростью фильтрации...

Автор:	lecter [ 13 июл 2017, 16:46 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Фильтр нужно брать диаметром 18 см, воронку - с таким углом, чтобы фильтр не прилегал к ней, иначе фильтроваться будет только через самый кончик фильтра. Такие маленькие вороночки не для фильтрования, а для розлива по маленьким флаконам. Фильтры 7-9 см больше предназначены для воронок Бюхнера, под вакуумом фильтровать. Получилось очень много фильтров

Автор:	adam [ 13 июл 2017, 17:40 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Solar писал(а): Решил сам приготовить раствор генцианового фиолетового. Отвесил 1 г и растворил в 10 мл спирта, добавил 90 мл карболовой кислоты 5% (тоже сам сделал). Встяхивал/взбалтывал/перемешивал и т.п. Ну значит думаю - дело за малым - профильтровать и готово. И тут блин засада. Взял фильтр "черная лента" и... по капле за 3-5 секунд... Ожидал, что будет побыстрее (мягко говоря). Это нормально? Фильтр - круг d=7 см, воронка d=3,5 см. Вобщем нафильтровал 50 мл примерно часа за полтора. Нормально ли, что на поверхности фильтрованного раствора есть нечто вроде пленочки с металлическим блеском (как у кристаллов генцианового фиолетового) или плохо отфильтровал? Еще возник вопрос. По прописям некоторые водные растворы (например, нейтральный красный или хризоидин) нужно растворить в кипятке и фильтровать горячими... Хм... С такой скоростью фильтрации... Фенол( карболовая кислота), не самый лучший компонент при приготовлении растворов красителей, да, в некоторых прописях он используется, но растворы красителей с фенолом достаточно нестойки и легко выпадают в осадок, после чего, окрашенный препарат можно выкинуть сразу. По своему опыту, достаточно устойчивы обыкновенные насыщенные спиртовые растворы( концентрация спирта не менее 50 процентов) анилиновых красителей. Водный раствор хризоидина хранится не более одной недели. Источник, на немецком языке Mikroskopische Färbemethoden Методы окраски в микроскопии( отличные прописи красителей и обработки препаратов). У меня спиртовой раствор хризоидина, приготовленный год тому назад, до сих пор - прозрачный как слеза. Напротив, анилиновый синий, отличный краситель - железобетонно не выпадает в осадок и в водных растворах. Ну, и гематоксилин, обычно также готовиться на воде, но прописи его совсем иные.

Автор:	Solar [ 20 июл 2017, 13:39 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Да, я встречал сведения о том, что генциановый фиолетовый устойчив в спиртовом растворе (как и большинство других красителей). Но сделал в 5% карболовой кислоте, потому что так прописано в методе окраски бактерий по Граму. Тем более, что окраска по Граму может дать недостоверный результат и зависит также от возраста культуры и многого другого. Поэтому решил в точности придерживаться прописи. Буду признателен за совет, как приготовить устойчивый и долго хранящийся раствор, который можно использовать для определения Грам+/-. Кстати, как делают готовые растворы, которые закупают мед. лаборатории? Еще возник вопрос про анатомическую окраску растений по методу Этцольда. Почитал книгу - Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. И где-то на форуме об этом методе писал Aktis. Так как не могу сделать мизерные навески красителей, то поступил следующим образом. Развел 1 г фуксина основного в 100 мл уксусной кислоты 2% - взял 1 мл этого раствора в другую баночку. Также 1 г сафранина в 100 мл уксуса 2% - взял 4 мл. Затем анилинового синего водорастворимого (он же водный синий) - 10 мл раствора. Добавил 85 мл уксусной кислоты 2% в баночку с тремя красителями и получил 100 мл краски Этцольда. И... профильтровал... Да так профильтровал, что весь анилиновый синий отфильтровался... Вобщем из раствора вишневого цвета получил розовый фильтрат - этот самый синий напроч исчез. Вот и как сделать краску Этцольда Фильтровал через "черную ленту" не обеззоленную. Кстати, делал отдельный водный раствор анилинового синего - нормально профильтровался, почти без осадка на фильтре.

Автор:	adam [ 20 июл 2017, 14:37 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Solar писал(а): Да, я встречал сведения о том, что генциановый фиолетовый устойчив в спиртовом растворе (как и большинство других красителей). Но сделал в 5% карболовой кислоте, потому что так прописано в методе окраски бактерий по Граму. Тем более, что окраска по Граму может дать недостоверный результат и зависит также от возраста культуры и многого другого. Поэтому решил в точности придерживаться прописи. Буду признателен за совет, как приготовить устойчивый и долго хранящийся раствор, который можно использовать для определения Грам+/-. Кстати, как делают готовые растворы, которые закупают мед. лаборатории? Еще возник вопрос про анатомическую окраску растений по методу Этцольда. Почитал книгу - Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. И где-то на форуме об этом методе писал Aktis. Так как не могу сделать мизерные навески красителей, то поступил следующим образом. Развел 1 г фуксина основного в 100 мл уксусной кислоты 2% - взял 1 мл этого раствора в другую баночку. Также 1 г сафранина в 100 мл уксуса 2% - взял 4 мл. Затем анилинового синего водорастворимого (он же водный синий) - 10 мл раствора. Добавил 85 мл уксусной кислоты 2% в баночку с тремя красителями и получил 100 мл краски Этцольда. И... профильтровал... Да так профильтровал, что весь анилиновый синий отфильтровался... Вобщем из раствора вишневого цвета получил розовый фильтрат - этот самый синий напроч исчез. Вот и как сделать краску Этцольда Фильтровал через "черную ленту" не обеззоленную. Кстати, делал отдельный водный раствор анилинового синего - нормально профильтровался, почти без осадка на фильтре. Вариантов окрасок по Граму - тьма-тьмущая в их самых разнообразных вариациях, смотрите по справочникам. Анилиновый синий - никак не относится к фталоцианиновым красителям, и Вы, естественно получили не краску Этцольда, а не пойми что, и сразу на помойку. Лучше вообще и полностью избегать подобных коктейлей, красители очень любят взаимодействовать между собой и выпадать в осадок. Примеры ботанических окрасок: Код: Beispiele für botanische Färbungen Einfachfärbung: mit Methylenblau, Karmin oder Toluidinblau Zweifachfärbung: Anilinblau-Fuchsin, Astrablau-Safranin, Hämatoxylin - Chrysoidin Dreifachfärbung: Wacker-Färbung (Acridinrot, Acriflavin, Astrablau) Dujardin - Färbung (Astrablau, Acridinrot, Chrysoidin) Dujardin - Färbung (Astrablau, Acridinrot, Chrysoidin) Simultanfärbung: Etzold‘s Farbgemisch (FCA = Fuchsin, Chrysoidin, Astrablau) -http://www.mikroskopie-bonn.de/_downloads/Einfache_Simultanfaerbung.pdf Простая окраска с метиленовым синим, кармином или толуидиновым синим. Двойная окраска : анилиновый синий-фуксин, астраблау( фталоцианиновый краситель, похож на альциановый синий) - сафранин, гематоксилин -хризоидин. Тройная окраска: по Вакеру(акридиновый красный, акрифлавин, астраблау) по Дюжардану(астраблау, хризоидин, акридиновый красный). Синхронная окраска: Смесь Этцольда((FCA =фуксин, хризоидин, астраблау.) ------------------------------ Конкретные прописи самих красителей и протоколов окраски( только вот, переводите сами, слишком много букв. ): Fuchsin-Chrysoidin-Astrablau nach Etzold (FCA-Färbung) Astrablau-Auramin-Safranin Ботаническая окраска конкретно с анилиновым синим и фуксином: Fuchsin-Anilinblau nach Eckert Сайт ботаническая микротехника, с примером окраски сафранин-астраблау- хризоидин:Eine schöne Dreifachfärbung mit Safranin-Astrablau-Chrysoidin (SAC-Färbung)

Автор:	lecter [ 20 июл 2017, 15:05 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Solar писал(а): Еще возник вопрос про анатомическую окраску растений по методу Этцольда. Почитал книгу - Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. И где-то на форуме об этом методе писал Aktis. Так как не могу сделать мизерные навески красителей, то поступил следующим образом. Развел 1 г фуксина основного в 100 мл уксусной кислоты 2% - взял 1 мл этого раствора в другую баночку. Также 1 г сафранина в 100 мл уксуса 2% - взял 4 мл. Затем анилинового синего водорастворимого (он же водный синий) - 10 мл раствора. Добавил 85 мл уксусной кислоты 2% в баночку с тремя красителями и получил 100 мл краски Этцольда. И... профильтровал... Да так профильтровал, что весь анилиновый синий отфильтровался... Вобщем из раствора вишневого цвета получил розовый фильтрат - этот самый синий напроч исчез. Вот и как сделать краску Этцольда Никак краску Этцольда не сделать. Есть метод окраски по Этцольду, а это несколько другое. Готовятся исходные растворы красителей потребной концентрации и фильтруются. Смешиваются ex tempore (перед употреблением), в небольшом количестве, каплями, и не фильтруются, т.к действующие вещества между собой реагируют, образуют сложные соединения и меняют свои свойства. Вот поэтому в чистом виде анилиновый синий через фильтровашку проходит, а в смеси с другими в-вами отлично окрасил целлюлозу, из которой эта фильтровашка и состоит

Страница 5 из 7	Часовой пояс: UTC + 3 часа
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group https://www.phpbb.com/

Автор:	Solar [ 20 июл 2017, 15:42 ]
Заголовок сообщения:	Re: Подкажите по красителям
Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. Барыкина Р.П. и др. 2004. писал(а): Комбинированная окраска по Этцольду (Etzold, 1983) Для различения одревесневших и неодревесневших оболочек готовят смесь трех красителей в 2%-й уксусной кислоте: основ ной фуксин в разведении 1:10000, сафранин в разведении 1:2500, водный синий в разведении 1:1000. Красят прогрессивным спосо¬ бом. Неодревесневшие оболочки окрашиваются в голубой цвет, одревесневшие — в различные оттенки красного. Смесь красите¬ лей проста в употреблении и может долго храниться. Для комбинированной окраски известен также похожий со¬ став (Krauter, 1985): 10 мг основного фуксина, 40 мг сафранина, 150 мг астраблау, 100 мл воды, 2 мл ледяной уксусной кислоты. Неодревесневшие оболочки окрашиваются в синий цвет, одре¬ весневшие — в красный, ядра — в розовый. Особенно хорошо эта окраска удается после фиксаторов, содержащих уксусную кислоту. А я повелся