Cocteau писал(а):
Ребята, помогите пожалуйста с ответом на вопрос: как и чем покрасить хромосомы (например гигантские из мотыля)?
ИЗГООТОВЛЕНИЕ АЦЕТОКАРМИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ
СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ ХИРОНОМУСА И ДРОЗОФИЛЫ
1. Выделение желез производится под бинокулярной лупой, плоско заточенными, двумя препаровальными иглами.
Хирономус.
1. Личинку 4-го возраста помещают на предметное стекло в каплю воды, находят головной конец (задний отдел имеет три продолговатых выроста, выполняющих опорную функцию при движении личинки).
2. Иглой отчленяют головной сегмент и, осторожно, выдавливают в воду содержимое первых трех-четырех сегментов личинки, в которых расположены прозрачные, студенистые гранулированные две железы.
Дрозофила.
1. Крупную личинку, отмытую от корма, помещают на предметное стекло в каплю охлажденного 0,6% физиологического раствора.
2. Одной иглой прижимают личинку, примерно, в середине тела, ближе к головному отделу, другой - прокалывают головной отдел и скользящим движением, как бы, выдергивают его. Парные железы удлиненные овальной формы (часть окружены матовой жировой тканью) должны отделиться вместе с головным отделом или остаться в переднем отделе тела, в этом случае поступают, как с вычленением желез у хирономуса.
II. Выделенные железы сразу помещают в каплю красителя, который наливается в часовое отекло, предметное стекло с лункой или в лунки на поверхности парафина. Краситель должен постоянно находиться в закрытом состоянии, в противном случае он теряет способность окрашивать.
Время окрашивания варьирует от 30 минут до 1 часа при комнатной температуре; при ускоренном методе окрашивания, при 37°С - время сокращается до 30 минут, не допуская перекрашивания слюнных желез.
Ацетокармин от 30 минут до 1 часа.
Лакто-орсеин 20 минут при 37°С.
III. После окрашивания слюнных желез, их помешают в каплю 45% уксусной кислоты на предметное стекло или в каплю насыщенного раствора хлоралгидрата в воде на 5 минут для частичной дифференцировки хромосом и цитоплазмы.
Среды заменяются на свежую каплю 45% уксусной кислоты. Материал осторожно накрывают покровным стеклом. Под слоем фильтровальной полоски удаляется избыток уксусной кислоты (не сдвигать покровное стекло!). Покровное стекло закрывают расплавленным парафином.
==============================
Ацетокармин
Уксусная ледяная к-та - 45 мл, нагретая
Кармин - 2-3 г
Дистиллированная вода - 55
Кипятить с обратным холодильником 30-40 минут, охладить, на второй день - фильтровать.
Красить - 6-10 мин. с обратным холодильником, кипятить на водяной бане, остудить, окрашенную меристему давить в капле 45% уксусной к-ты.
Ацето-орсеин 2%
Уксусная ледяная к-та - 60 мл нагреть до появления паров, на кипение укажут капли на колбе с обратным холодильником 5-6 мин., всыпать в колбу, снятую с огня (без кипения), 2 г орсеина, поставить на огонь - 30 сек., сразу влить 40 мл дистиллированной воды (не должна быть кислой?) и поставить под холодную воду, остудить до температуры холодной воды -фильтровать. Хранить в холодильнике!
Красить при комнатной температуре - 1 час.
Орсеин на молочной кислоте
Уксусная ледяная к-та - 50 мл + 60% молочной к-ты - 50 мл, смесь в колбе с обратным холодильником довести -до кипения и осторожно! всыпать орсеин 2 г - кипятить 4-5 минут, охладить быстро под струёй холодной воды, отфильтровать.
Красить 20 минут при 37°С.
Вход
Регистрация
FAQ
Поиск
[/url]
