Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 09 дек 2019, 03:27

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 691 ]  На страницу Пред.  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ... 47  След.
Автор Сообщение
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 09:51 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1770
Откуда: Волгоград
Сэм-59 писал(а):
Кстати, обнаружил такую вещь. Если настроить освещение под 90х (изображение тела свечения на апертурной диафрагме, в поле зрения резко видна полевая диафрагма, иммерсия на конденсоре), то выходной зрачок объектива заполняется чуть больше чем наполовину (обнаружил, наблюдая в "фазовый телескоп"). Поднимая конденсор относительно этой настройки и увеличивая раскрытие полевой диафрагмы (?!) можно заполнить практически весь выходной зрачок. Так что считать лучшим вариантом настройки освещения: резкое изображений полевой диафрагмы или максимально заполненный зрачок?

Странно как-то... заполнение выходного зрачка объектива регулируется раскрытием апертурной диафрагмы конденсора... хотя, даже с апланатическим конденсором настроить свет по Келеру с объективом 90х можно только очень условно, аберрации конденсора недостаточно исправлены, думаю, лучшим вариантом будет все же заполненный выходной зрачок объектива.
А у вас апертурная диафрагма достаточно раскрыта? Т.к. степень заполнения зрачка регулируется только ею, ведь только она отображается в плоскости выходного зрачка объектива при настройке по Келеру.

Сэм-59 писал(а):
Это еще и из-за стекинга.

Да, отчасти, но основную лепту вносит все же матрица веб-камеры. На видео кстати картинка приятнее смотрится, т.к. эта сглаженность менее заметна.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МБИ-4, МББ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 10:03 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Rasalam писал(а):
А у вас апертурная диафрагма достаточно раскрыта?

Конечно! Раскрытие полевой диафрагмы дает увеличение заполнения зрачка при подъеме конденсора относительно настройки на резкость полевой диафрагмы при полностью открытой апертурной диафрагме. У меня, правда, не штатный для БИОЛАМа КОН-3 с вводимой доп. линзой, а какой-то другой конденсор А=1,2 (фамилии на нем нет).

Кстати, подложил под препарат высокую металлическую шайбу (из разобранного жесткого диска, с хорошей плоскопараллельностью сторон), с объективом 9х попал в настройку по Келеру, цвета стали гораздо лучше!


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 11:02 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Можно пока вставить свой вопрос? Красил ли кто по Романовскому-Гимзе? Я в основном красил бактерий простыми методами (метиленовым синим), а также по Граму. Вот заинтересовался окраской сапрофитных простейших и спирохет ротовой полости. По инструкции надо выдержать в красителе Романовского-Гимзе (готовом растворе) 20-40 мин. Выдерживал 20-30 мин, прокрашивание ооочень слабое. Выдерживал час - тоже слабо. Один врач посоветовал на всю ночь оставить. Ротовые амебы окрасились неплохо, а вот спирохеты еле-еле. Может как-то спиртом (или формидроном?) предварительно обесцветить, а то я фиксирую по-старинке над пламенем горелки.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 11:31 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1770
Откуда: Волгоград
epid писал(а):
Можно пока вставить свой вопрос? Красил ли кто по Романовскому-Гимзе? Я в основном красил бактерий простыми методами (метиленовым синим), а также по Граму. Вот заинтересовался окраской сапрофитных простейших и спирохет ротовой полости. По инструкции надо выдержать в красителе Романовского-Гимзе (готовом растворе) 20-40 мин. Выдерживал 20-30 мин, прокрашивание ооочень слабое. Выдерживал час - тоже слабо. Один врач посоветовал на всю ночь оставить. Ротовые амебы окрасились неплохо, а вот спирохеты еле-еле. Может как-то спиртом (или формидроном?) предварительно обесцветить, а то я фиксирую по-старинке над пламенем горелки.


Попробуйте чуть подкислить краситель (уксус) или сделать более щелочным (сода), там кроме времени окраски большое значение имеет рН красителя.
А спирохеты в какой цвет окрасились ?

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МБИ-4, МББ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 11:57 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
У меня они получились слабо голубого цвета. И то при длительной окраске. Знаю, что спирохеты в принципе слабо поддаются классическим окраскам. Но по Романовскому-Гимзе, пишут, вроде как должны неплохо окрашиваться. А у меня не хотят никак.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 12:03 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1770
Откуда: Волгоград
epid писал(а):
У меня они получились слабо голубого цвета. И то при длительной окраске. Знаю, что спирохеты в принципе слабо поддаются классическим окраскам. Но по Романовскому-Гимзе, пишут, вроде как должны неплохо окрашиваться. А у меня не хотят никак.


Если слабо голубого цвета, то значит надо красить основными красителями, типа метиленовой синьки. Возможно Азур II их сильнее и не прокрасит.
Попробуйте также зафиксировать препарат не в пламени а в этаноле.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МБИ-4, МББ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 12:05 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
А еще инструкция к красителю говорит, что необходимо развести концентрированный краситель с дистиллированной водой в пропорции 1:10. Я собственно так и делал. Может покрепче сделать, 1:5 к примеру? Бактерии конечно и в 1:10 здорово окрашиваются за полчаса, но со спирохетами сложнее.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 12:08 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Rasalam писал(а):
epid писал(а):
У меня они получились слабо голубого цвета. И то при длительной окраске. Знаю, что спирохеты в принципе слабо поддаются классическим окраскам. Но по Романовскому-Гимзе, пишут, вроде как должны неплохо окрашиваться. А у меня не хотят никак.


Если слабо голубого цвета, то значит надо красить основными красителями, типа метиленовой синьки. Возможно Азур II их сильнее и не прокрасит.
Попробуйте также зафиксировать препарат не в пламени а в этаноле.

А метиленовый синий вроде входит в состав. Или его побольше добавить? Я-то использую покупной готовый краситель (азур+эозин+метиленовый синий).


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 12:17 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1770
Откуда: Волгоград
epid писал(а):
Rasalam писал(а):
epid писал(а):
У меня они получились слабо голубого цвета. И то при длительной окраске. Знаю, что спирохеты в принципе слабо поддаются классическим окраскам. Но по Романовскому-Гимзе, пишут, вроде как должны неплохо окрашиваться. А у меня не хотят никак.


Если слабо голубого цвета, то значит надо красить основными красителями, типа метиленовой синьки. Возможно Азур II их сильнее и не прокрасит.
Попробуйте также зафиксировать препарат не в пламени а в этаноле.

А метиленовый синий вроде входит в состав. Или его побольше добавить? Я-то использую покупной готовый краситель (азур+эозин+метиленовый синий).


А вы пробовали рН краски менять ? Поставьте опыт такой :) Концентрацию можно увеличить, только тогда то, что прокрашивалось раньше хорошо, будет наверное совсем темным.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МБИ-4, МББ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 12:27 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Нет, рН не пробовал менять, попробую. Параллельно поставлю с рН со сдвигом в ту и в другую сторону. А что другие микробы перекрасятся, это не беда, цель у меня в данном случае другая)))
Тогда с учетом ваших рекомендаций сделаю так:
1. фиксация в этаноле
2. окраска более крепким раствором красителя (часа, думаю, 2-3, к примеру)
2а. окраска красителем с добавлением уксусной кислоты (параллельно)
2б. окраска красителем с добавлением соды (параллельно)


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 13:06 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 31 дек 2012, 13:23
Сообщения: 1770
Откуда: Волгоград
epid писал(а):
Нет, рН не пробовал менять, попробую. Параллельно поставлю с рН со сдвигом в ту и в другую сторону. А что другие микробы перекрасятся, это не беда, цель у меня в данном случае другая)))
Тогда с учетом ваших рекомендаций сделаю так:
1. фиксация в этаноле
2. окраска более крепким раствором красителя (часа, думаю, 2-3, к примеру)
2а. окраска красителем с добавлением уксусной кислоты (параллельно)
2б. окраска красителем с добавлением соды (параллельно)


И заодно прошу сообщить (если есть возможность - с фото) результаты ваших экспериментов. Интересно стало :)

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МБИ-4, МББ-1А


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 13:29 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
epid писал(а):
Можно пока вставить свой вопрос? Красил ли кто по Романовскому-Гимзе? Я в основном красил бактерий простыми методами (метиленовым синим), а также по Граму. Вот заинтересовался окраской сапрофитных простейших и спирохет ротовой полости. По инструкции надо выдержать в красителе Романовского-Гимзе (готовом растворе) 20-40 мин. Выдерживал 20-30 мин, прокрашивание ооочень слабое. Выдерживал час - тоже слабо. Один врач посоветовал на всю ночь оставить. Ротовые амебы окрасились неплохо, а вот спирохеты еле-еле. Может как-то спиртом (или формидроном?) предварительно обесцветить, а то я фиксирую по-старинке над пламенем горелки.


по поводу спирохет, в окраске они очень прихотливы и окрашиваются краской по Романовскому — Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет( отсюда и название бледная трепонема), непатогенные трепонемы — в синий или фиолетовый. pH воды должен быть строго нейтральный, вода желательно бидистиллированая ( а лучше Деионизованная).
По поводу фиксации над пламенен спиртовки, это скорей и портит вам окраску, только химическая фиксация!

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 13:53 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
epid, прибавлять "на глаз" кислоту или щелочь - непродуктивно. Уровень рН должен соблюдаться достаточно строго. Поэтому стоит обзавестись чем-то для определения рН. Можно индикаторной бумагой, можно купить в аптеке тест-полоски для определения кислотности мочи (та же бумага, но с меньшим диапазоном определяемого рН), в идеале, конечно, рН-метр, тогда можно мерить и непосредственно в красителе. А краситель Романовского делают с расчетом на разведение в т.ч. и потому, что для разных объектов рекомендуется разный уровень рН, вот его и разводят соответственно забуференной водой.

Юрий, а бидистиллят дает чисто нейтральную реакцию? Его рН не около 5? А нужно 7?


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 14:08 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 897
Откуда: Россия, г. Москва
Сэм-59 писал(а):
.
Юрий, а бидистиллят дает чисто нейтральную реакцию? Его рН не около 5? А нужно 7?

В ТЕОРИИ 2dH2O, должен давать если перегонять на стекле(кварцевое стекло) близкое значение pH к 7+\-. Но проще конечно разводить краситель на буфере( фосфатном). Краситель романовского очень капризный и без соответствующего опыта с первого раза редко получается воспроизвести правильную цветовую картину.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 13 янв 2014, 16:12 
Не в сети

Зарегистрирован: 09 авг 2013, 20:00
Сообщения: 121
Юрий писал(а):
по поводу спирохет, в окраске они очень прихотливы и окрашиваются краской по Романовскому — Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет( отсюда и название бледная трепонема), непатогенные трепонемы — в синий или фиолетовый. pH воды должен быть строго нейтральный, вода желательно бидистиллированая ( а лучше Деионизованная).
По поводу фиксации над пламенен спиртовки, это скорей и портит вам окраску, только химическая фиксация!

Все учту! Пока попробовал со слегка (на глаз) подкисленным красителем.
Развел краситель с дистиллированной водой 1:5. Фиксировал в этаноле. Красил полным погружением в течение 2-х часов. Мазок промыл, просушил, завтра промикроскопирую.
Завтра же попробую все то же, но без подкисления с измененной концентрацией раствора. Интересно как отреагировал препарат на повышение концентрации красителя.
Вода у меня в наличии максимум просто дистиллированная.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 691 ]  На страницу Пред.  1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ... 47  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: Majestic-12 [Bot] и гости: 12


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика