Астрономия и микроскопия
http://forum.shvedun.ru/

Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=1581		 Страница 37 из 51
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 11:57 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Ну вот попробовал для эксперимента развести саму малость в обычной бутилированной воде,в шприце, и если приглядеться то заметны в растворе мелкие темные точки нерастворенного(свернувшегося) красителя.Вопрос: это от того что вода не дистиллированная, или оттого что РН не соответствующий?Но попробовал всё же окрасить.
Мазок крови окрасился с преобладанием синеватых тонов, эритроциты бледно серовато-синие, ядра лейкоцитов более яркие сине-фиолетового цвета.
Автор:  Microbiologist [ 23 мар 2017, 12:27 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Эритроциты должны быть бледно-розовыми или розовыми. Вероятная причина неправильной окраски - вода для разведения была не нейтральной реакции.
Автор:  lecter [ 23 мар 2017, 12:32 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Азур-эозин вообще капризный, водой его как не разводи, все равно хлопья выпадают. Может действительно попробовать разными буферами разводить с рН 6,8 - 7,0 - 7,2. Я проще делаю, крашу неразведенным 1-2 минуты.
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 12:37 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
lecter писал(а):
Азур-эозин вообще капризный, водой его как не разводи, все равно хлопья выпадают. Может действительно попробовать разными буферами разводить с рН 6,8 - 7,0 - 7,2. Я проще делаю, крашу неразведенным 1-2 минуты.

Так, а при окраске неразведенным есть какие-то особенности? Насколько качественно происходит окраска? Можно ли в таком случае, для экономии, просто положить на мазок фильтровальную бумагу и пропитать ее минимально необходимым количеством неразведенного красителя?
И разводят его с какой целью? Для экономии или всё же для более правильной окраски?
Автор:  Microbiologist [ 23 мар 2017, 13:00 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Попробуйте развести краситель 1:1 обычной кипячёной водой из под крана. Время окраски 40 минут. Результат, возможно будет лучше. На фильтровальную бумагу из-за опасности подсыхания лить, наверное не стоит. Налейте разведённый краситель просто на фиксированный мазок. Я сам так когда-то окрашивал, когда ещё не знал о влиянии рН, результаты были хорошими.
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 13:08 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Хорошо, сегодня будем так попробовать.
Автор:  lecter [ 23 мар 2017, 15:55 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Я наношу 2-3 капли неразведенного красителя и растягиваю его стеклянным шпателем или палочкой по всему мазку, не касаясь самого мазка. Через 1-2 минуты промыть и высушить.
Высыхания не бойтесь, в его составе глицерин.
С фильтровашкой получается методика окраски по Синёву, только там спиртовым р-ром пропитывается и высушивается, при необходимости накладывается на мазок и смачивается, очень удобно и быстро. Но это для обычных красителей, не для азур-эозина. Разводить водой даже 1:1, есть риск выпадения хлопьев, лучше уж попробовать разводить 10-20-30 % р-ром глицерина, он этот краситель стабилизирует.
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 16:19 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Так, это уже интереснее. У меня есть флакон глицерина из аптеки, но какой он концентрации на нем не написано, на подвижность как растительное масло. В какой пропорции его можно смешивать с красителем?
Автор:  lecter [ 23 мар 2017, 16:38 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Попробуйте глицерин развести в 5 раз, а потом на стекле смешайте с красителем в разных пропорциях, 1:1, 1:5, 1:10 и посмотрите прозрачный ли раствор получается?
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 17:27 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
lecter писал(а):
Попробуйте глицерин развести в 5 раз, а потом на стекле смешайте с красителем в разных пропорциях, 1:1, 1:5, 1:10 и посмотрите прозрачный ли раствор получается?

Все равно частицы красителя видны.
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 17:54 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
В общем так: с глицерином-вода 1:5 и краской напополам пополам эритроциты светло-фиолетовые, ни один лейкоцит не окрасился совершенно никак, красил минут 30.
А с краской вообще без разбавления все эритроциты сильно повредились и склеились в кашу, но ни один лейкоцит также не окрасился, красил минуты 2-3.
Автор:  lecter [ 23 мар 2017, 17:59 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
А чем мазки фиксировали?
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 18:05 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Так же как и в первый раз,96% этиловый спирт 30 мин.
Единственное отличие: в первый раз спирт налил и погрузил стекло горизонтально мазком вверх и иногда покачивал чашку. А в эти два раза просто налил как можно больше спирта на мазок,покрыл почти всё стекло и не прикасался 30 мин.
Автор:  lecter [ 23 мар 2017, 18:21 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Странно, что-то где-то не то... скорее всего рН.
У Ромейса хорошо написано с пункта 1336 и далее.
Автор:  r9uaaj [ 23 мар 2017, 18:25 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Достаточно ли наливания спирта прямо на мазок (без погружения). Нужно ли тут перемешивание (конвекция) спирта?
Страница 37 из 51 Часовой пояс: UTC + 3 часа
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group
https://www.phpbb.com/