Астрономия и микроскопия http://forum.shvedun.ru/ |
|
Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=1581 |
Страница 4 из 51 |
Автор: | guddini [ 20 ноя 2013, 00:28 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Юрий писал(а): с нейтрализованной дистиллированной водой Вода для инъекций подойдет? |
Автор: | Юрий [ 20 ноя 2013, 00:42 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
guddini писал(а): Юрий писал(а): с нейтрализованной дистиллированной водой Вода для инъекций подойдет? может не подойти, как мне помнится там PH 5,0-7,0 может скакать. |
Автор: | Cocteau [ 16 дек 2013, 08:25 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): Cocteau писал(а): Первый образец - панцирь диатомовой водоросли заключенный в смесь касторового масла с канифолью. Фазовый контраст КФ-1 с объективом 90/1,25. Здорово выглядит, только ХРУ... А можно подробнее про заключение в ветку viewtopic.php?f=6&t=1581 ? И еще интересно было бы сделать такой же кадр с АПО в светлом поле, в тех же условиях, что и зонд.Все как в видео про приготовление образцов панцирей диатомовых водорослей, только заключение в смесь канифоли и касторового масла специально для уменьшения разности показателей преломления между средой и объектами для "разглядывания" методом фазового контраста. Исходя из теории фазового контраста ("Микроскопы" Скворцов, Панов, Поляков, Федин), КФ-1 может однозначно преобразовывать разность фаз в интенсивность при разности фаз не более 45 градусов. Для длины волны 560 нм это соответствует 70 нм в разности оптического пути, что соответствует толщине объектов 1 мкм при разности показателей преломления 1.50-1.43=0.07. |
Автор: | Сэм-59 [ 04 янв 2014, 11:31 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Нашел старый пост Актиса, тоже о елочной иголке: viewtopic.php?f=6&t=166&p=8391#p8391. Фото - загляденье. А полость, оказывается, - это смоляной канал. |
Автор: | Aktis [ 05 янв 2014, 12:00 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): Новогодний пост: разглядываем елочную иголку, а именно – ее срезы. Хорошее направление, похвально Вручную качественный срез листочка ели сделать сложновато, необходимы тренировки. Так как листочков на новогодней ели много, то можно тренироваться ежедневно три раза в день. По красителям. Толуидиновый синий лучше использовать при окраске свежих срезов, не фиксированных. Фуксин кислый или основной? Если основной, то раствор лучше готовить в 50%-м этиловом спирте или в 2%-й уксусной кислоте. |
Автор: | Сэм-59 [ 05 янв 2014, 15:27 ] | ||
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение | ||
Aktis писал(а): Толуидиновый синий лучше использовать при окраске свежих срезов, не фиксированных. Спасибо за совет, Актис. Да, я тоже заметил, что с нефиксированными срезами красители "работают" иначе. Только для этих опытов пока выделял отбракованнные срезы (толстые). Пример - на фото 6, нефиксированный срез после окраски в смеси азура с хризоидином.Aktis писал(а): Фуксин кислый или основной? Если основной, то раствор лучше готовить в 50%-м этиловом спирте или в 2%-й уксусной кислоте. Фуксин основной, у мена заготовлены насыщенный спиртовой раствор и карболовый по Цилю. Для окраски использую разведенный фуксин Циля (водный фуксин по Пфейферу).
|
Автор: | timizas [ 05 янв 2014, 18:09 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Хорошо получается. |
Автор: | Сэм-59 [ 07 янв 2014, 00:50 ] | ||||||
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение | ||||||
timizas писал(а): Хорошо получается. Спасибо, Тимофеюс! Еще бы пристойную камеру...Aktis писал(а): Вручную качественный срез листочка ели сделать сложновато Да уж. Особенно продольный срез. Вот, однако, образчик: фото 7 - продольный радиальный нефиксированный; фото 8 - этот же срез подкрашенный смесью азура с хризоидином (оба красителя не для цитоплазмы, поэтому, наверное, много бесцветных клеток).С поперечными срезами легче. Резал в пробке (не всякая годится, нужно подбирать). Aktis писал(а): Толуидиновый синий лучше использовать при окраске свежих срезов, не фиксированных Отчитываюсь: фото 9 - свежий срез; фото 10 - этот же срез подкрашенный толуидиновым синим; фото 11 - срез из этой же серии, подкрашен азуром с хризоидином. Напоминают полотна импрессионистов Все фото с объективом 20х/0,4. Все со стекингом (шаг ок. 1 мкм, по 15 - 20 кадров, стекинг в PICOLAY, настройки по умолчанию) А вот на фиксированных срезах краски совсем блеклые...
|
Автор: | Сэм-59 [ 12 янв 2014, 22:44 ] | ||||
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение | ||||
Еще один объект: лист алоэ древовидного. Наверное. есть какой-то "секрет" изготовления срезов этих листьев без заливки в парафин, т.к. в тонких срезах не держится серединка листа. Поэтому на фото только фрагменты срезов. Фото 1. Объектив 20х, свежий нефиксированный срез. Зеленые хлоропласты присутствуют в достаточно тонком слое клеток. Фото 2. Объектив 20х, нефиксированный срез, подкрашенный толуидиновым синим. Кутикула и клетки эпидермы (или гиподермы?) приобрели синий (голубой) оттенок, а серединка с проводящими каналами - в фиолетовый. Фото 3. Объектив 40х. Срез зафиксирован в ФАА. Комбинированная окраска. Краситель № 1 - основной фуксин 0,01% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те. Промывка в 2% уксусной к-те до окончания отхождения облачков краски. Краситель № 2 - анилиновый голубой водорастворимый 0,15% в 2% уксусной к-те. Снова промывка и помещение среза в глицерин. Помещаю под покровное стекло в глицерине, т.к. препарат не высыхает, это удобно. Кутикула и клетки эпидермы окрасились хризоидином в малиновый цвет, ядра эпидермы фуксином в сиреневый, хлоропласты окрасились анилиновым голубым. Пытался совместить все красители в одном растворе (как у Этцольда), но при добавлении анилинового голубого водорастворимого выпадает осадок.
|
Автор: | Rasalam [ 12 янв 2014, 23:51 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): Наверное. есть какой-то "секрет" изготовления срезов этих листьев без заливки в парафин, т.к. в тонких срезах не держится серединка листа. Поэтому на фото только фрагменты срезов. Вообще удивительно, как вам удается такие тонкие срезы делать без микротома и заливки в плотные среды. У меня никогда так не получается Сэм-59 писал(а): Фото 3. Объектив 40х. Срез зафиксирован в ФАА. Комбинированная окраска. Краситель № 1 - основной фуксин 0,01% + хризоидин 0,04% в 2% уксусной к-те. Промывка в 2% уксусной к-те до окончания отхождения облачков краски. Краситель № 2 - анилиновый голубой водорастворимый 0,15% в 2% уксусной к-те. Снова промывка и помещение среза в глицерин. Помещаю под покровное стекло в глицерине, т.к. препарат не высыхает, это удобно. Кутикула и клетки эпидермы окрасились хризоидином в малиновый цвет, ядра эпидермы фуксином в сиреневый, хлоропласты окрасились анилиновым голубым. Красивая микрофотография получилась. |
Автор: | guddini [ 12 янв 2014, 23:55 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 а чем Вы делаете срезы? |
Автор: | Сэм-59 [ 13 янв 2014, 00:31 ] | ||||
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение | ||||
Rasalam писал(а): Вообще удивительно, как вам удается такие тонкие срезы делать без микротома и заливки в плотные среды. guddini писал(а): Сэм-59 а чем Вы делаете срезы? Ну почему же без микротома? Вот ведь: viewtopic.php?f=6&t=1603, смотрите самый последний пост. Режу опасными бритвами; бритвы и камни для заточки бритв остались от дедов, номеров камней не знаю; правлю на обыкновенном кожаном ремне без пасты ГОИ (паста есть, да ремень в носке ). Rasalam писал(а): Красивая микрофотография получилась. Спасибо. К сожалению, фото очень отдаленно передает то, что видно в окуляр, там краше! Вот еще один препарат: срез корня тапенамбура, окраска сафранином, хризоидином и анилиновым голубым. Фото 1 - объектив 3,5х, Фото 2 - объектив 9х. С этими объективами приходится свинчивать верхнюю линзу конденсора, при этом интенсивность цветов падает. Сравните с Фото 3 - объектив 20х.
|
Автор: | Rasalam [ 13 янв 2014, 07:33 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): Rasalam писал(а): Вообще удивительно, как вам удается такие тонкие срезы делать без микротома и заливки в плотные среды. guddini писал(а): Сэм-59 а чем Вы делаете срезы? Ну почему же без микротома? Вот ведь: http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=1603, смотрите самый последний пост. Режу опасными бритвами; бритвы и камни для заточки бритв остались от дедов, номеров камней не знаю; правлю на обыкновенном кожаном ремне без пасты ГОИ (паста есть, да ремень в носке ). Rasalam писал(а): Красивая микрофотография получилась. Спасибо. К сожалению, фото очень отдаленно передает то, что видно в окуляр, там краше! Вот еще один препарат: срез корня тапенамбура, окраска сафранином, хризоидином и анилиновым голубым. Фото 1 - объектив 3,5х, Фото 2 - объектив 9х. С этими объективами приходится свинчивать верхнюю линзу конденсора, при этом интенсивность цветов падает. Сравните с Фото 3 - объектив 20х. Да, заметно, что цвета не такие.. а освещение по Келеру ? Такое впечатление, что конденсор опущен. У меня такая же вебка как у вас, только в окулярном исполнении. У них у всех один недостаток существенный - маленький динамический диапазон, поэтому на фото присутствует некоторая "мультяшность", тем не менее, фото замечательные. |
Автор: | Сэм-59 [ 13 янв 2014, 09:02 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Rasalam писал(а): Да, заметно, что цвета не такие.. а освещение по Келеру ? Такое впечатление, что конденсор опущен. Осветитель ОИ-35. На 20х и выше настройка строго по Келеру. А со свинченной фронтальной линзой конденсора на объективах 9х и 3,5х конденсор немного недоопущен: на выходном окне ОИ-35 у меня приклеена оправа с резьбой для вкручивания поляризационного фильтра, она мешает, надо будет подправить конструкцию... Идея: можно подложить что-то под препарат, чтобы его приподнять... попробую. Кстати, обнаружил такую вещь. Если настроить освещение под 90х (изображение тела свечения на апертурной диафрагме, в поле зрения резко видна полевая диафрагма, иммерсия на конденсоре), то выходной зрачок объектива заполняется чуть больше чем наполовину (обнаружил, наблюдая в "фазовый телескоп"). Поднимая конденсор относительно этой настройки и увеличивая раскрытие полевой диафрагмы (?!) можно заполнить практически весь выходной зрачок. Так что считать лучшим вариантом настройки освещения: резкое изображений полевой диафрагмы или максимально заполненный зрачок? Rasalam писал(а): ...на фото присутствует некоторая "мультяшность"... Это еще и из-за стекинга. |
Страница 4 из 51 | Часовой пояс: UTC + 3 часа |
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group https://www.phpbb.com/ |