Астрономия и микроскопия
http://forum.shvedun.ru/

Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=1581		 Страница 3 из 51
Автор:  Сэм-59 [ 27 авг 2013, 15:16 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
А вот и панцирь диатомеи Diploneis subadvena, заключенный в этот пиперин. Объектив ЛОМО 90х/1.25, иммерсия для объектива и для конденсора, максимальное раскрытие апертурной диафрагмы. Стекинг 19-ти кадров (панцирь лежит "под углом" к плоскости стекла). Цвет фона примерно соответствует цвету расплава пиперина, который видится без микроскопа (выбрано ручной установкой баланса белого), в окуляре цвет фона - светло-желтый.

Для сравнения - еще один панцирь, Navicula Hennedyi, чуть более крупный. Условия съемки те же, но одиночный кадр. Препарат выглядит примерно так же, как при заключении в канадский бальзам - панцирь плавает в иммерсионном масле (показатели преломления близки).

Почувствуйте разницу в коэффициенте преломления заключающей среды.

Вложения:
Комментарий к файлу: Diploneis subadvena. Панцирь заключен в пиперин
Диатом 2.jpg
Диатом 2.jpg [ 41.85 КБ | Просмотров: 17940 ]
Комментарий к файлу: Navicula Hennedyi. Панцирь плавает в иммерсионном масле
Диатом 3.jpg
Диатом 3.jpg [ 13.11 КБ | Просмотров: 17940 ]
Автор:  guddini [ 16 ноя 2013, 17:54 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Как, чем и в каких пропорциях разводить йод, что бы использовать его для окраски?
Автор:  Юрий_Тк [ 16 ноя 2013, 20:05 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
1%-ный раствор в дист. воде (обычно в воду добавляют йодистый калий для улучшения растворимости йода). Но лучше использовать другой краситель, например, фуксин.
Автор:  Rasalam [ 16 ноя 2013, 21:58 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
Как, чем и в каких пропорциях разводить йод, что бы использовать его для окраски?


Можете использовать обычный 5% спиртовой раствор йода, разводите его водой, примерно 1 капля раствора йода на 5 капель воды, этим раствором и окрашивайте. Время окраски подбирается опытным путем и зависит от того, что вы хотите окрасить.
Юрий_Тк написал еще про фуксин. В аптеке можете приобрести препарат "Фукорцин", копейки стоит, в его состав входит основной фуксин, он тоже неплохо красит.
Автор:  sigissoft [ 19 ноя 2013, 15:45 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Rasalam писал(а):
В аптеке можете приобрести препарат "Фукорцин", копейки стоит, в его состав входит основной фуксин, он тоже неплохо красит.
А как его использовать? Или он в жидком, готовом к окраске, виде продаётся?
Автор:  Юрий_Тк [ 19 ноя 2013, 16:46 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Фукорцин - примерно 0,3%-ный раствор основного фуксина в дист. воде. Но в этом растворе есть и другие компоненты - фенол, борная кислота, резорцин, спирт, ацетон. Использовать легко - на фиксированный мазок нанести несколько капель, оставить на несколько минут. Затем слить с препарата раствор, промыть дист. водой. Подсушить несколько минут и можно наблюдать подкрашенный препарат.
Автор:  Сэм-59 [ 19 ноя 2013, 18:26 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Возможно, будет удобнее разводить фукорцин дист. водой, т.к. в неразведенном виде он достаточно интенсивно окрашивает. Здесь нужно будет немного поэкспериментировать. Все зависит от объекта окраски. Сушка препарата допустима только в отношении мазков, всякие срезы и кожицы-пленочки не сушите, а помещайте прямо вместе с дист. водой под покровное стекло; чтобы препарат быстро не высох, можно купить в той же аптеке глицерин, и после окраски помещать препарат на некоторое время в водно-глицериновую смесь (чтобы глицерин пропитал препарат), и с этой смесью потом под покровное стекло - можно будет любоваться несколько дней, при этом, правда, глицерин будет постепенно вымывать фуксин из препарата.
Автор:  Сэм-59 [ 19 ноя 2013, 20:40 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
Как, чем и в каких пропорциях разводить йод, что бы использовать его для окраски?

Кстати, йод используется чаще не как самостоятельный краситель (очень нестоек), а как "фиксатор" другого красителя (например, в методике окраски бактерий по Граму) или в случае, когда реакция с йодом окрашивает объект наблюдения (например, зерна крахмала). Сообщите, что собираетесь красить.
Автор:  guddini [ 19 ноя 2013, 23:35 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Сэм-59 писал(а):
Кстати, йод используется чаще не как самостоятельный краситель (очень нестоек), а как "фиксатор" другого красителя (например, в методике окраски бактерий по Граму) или в случае, когда реакция с йодом окрашивает объект наблюдения (например, зерна крахмала). Сообщите, что собираетесь красить.

Кровь хотелось бы хорошо покрасить...
Автор:  Юрий [ 19 ноя 2013, 23:40 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
Сэм-59 писал(а):
Кстати, йод используется чаще не как самостоятельный краситель (очень нестоек), а как "фиксатор" другого красителя (например, в методике окраски бактерий по Граму) или в случае, когда реакция с йодом окрашивает объект наблюдения (например, зерна крахмала). Сообщите, что собираетесь красить.

Кровь хотелось бы хорошо покрасить...

если говорить о общепринятых методиках, то это окраска по романовскому, по лейшману, Май-Грюнвальду, в общем это одно и таже окраска смесью АЗУР 2-эозина.
Второй способ классический для гистологии: гематоксилин-эозином.
Нужны соответствующие красители. первые методы очень требовательны к качеству реактивов pH воды и тд. ( по хорошему нужен буферный раствор для окраски по романовскому)
Автор:  Сэм-59 [ 19 ноя 2013, 23:45 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
Кровь хотелось бы хорошо покрасить...

Для крови йод не годится. Для обычного знакомства с форменными элементами крови оптимально - окраска по Романовскому. Для правильного приготовления мазка Вам понадобятся: метиловый спирт (яд), красители азур и эозин, фосфатный буфер. Ну и хорошо обезжиренные стекла. Сделаю подборку и пришлю в личку. Но чтобы иметь "образцовый препарат" (уже кому-то давал такой совет) - зайдите в ближайшую больницу и просто попросите в лаборатории ненужный им уже образец мазка крови.
Автор:  guddini [ 19 ноя 2013, 23:49 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
У меня есть много этилового спирта. Он пойдет для фиксации?
Автор:  Юрий [ 19 ноя 2013, 23:54 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
У меня есть много этилового спирта. Он пойдет для фиксации?

да, его можно использовать.
Автор:  guddini [ 19 ноя 2013, 23:57 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
Юрий писал(а):
guddini писал(а):
У меня есть много этилового спирта. Он пойдет для фиксации?

да, его можно использовать.

Юрий, а на какое время погружать мазок? Есть какие нибудь нюансы?
Автор:  Юрий [ 20 ноя 2013, 00:22 ]
Заголовок сообщения:  Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение
guddini писал(а):
Юрий писал(а):
guddini писал(а):
У меня есть много этилового спирта. Он пойдет для фиксации?

да, его можно использовать.

Юрий, а на какое время погружать мазок? Есть какие нибудь нюансы?

Методика.

Высохшие на воздухе мазки крови, в обыкновенные стеклянные стаканы, в этиловом и денатурированном спирте — не менее 30 мин.

По окончании срока фиксации препараты вынимают пинцетом, сушат на воздухе или ополаскивают в банке с нейтрализованной дистиллированной водой и укладывают мазками кверху на стеклянный мостик для окраски.
Страница 3 из 51 Часовой пояс: UTC + 3 часа
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group
https://www.phpbb.com/