Астрономия и микроскопия http://forum.shvedun.ru/ |
|
Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение http://forum.shvedun.ru/viewtopic.php?f=6&t=1581 |
Страница 17 из 51 |
Автор: | guddini [ 13 авг 2014, 21:41 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Rasalam писал(а): guddini писал(а): Кто подскажет, в каких пропорциях разводить фуксин для окраски? А что вы красить будете и какой у вас фуксин ? Научился таки наконец более менее нормально мазок крови на стекло натягивать Вот и крашу ее всем подряд, что под руками есть))) |
Автор: | Rasalam [ 13 авг 2014, 23:12 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
guddini писал(а): фукорцин из аптеки. Научился таки наконец более менее нормально мазок крови на стекло натягивать Вот и крашу ее всем подряд, что под руками есть))) А... Я не развожу, правда крашу не кровь, а бактерии, грибы... если перекрашиваю, отмываю потом спиртом. Кровь лучше красить метиленовым синим, в любом зоомагазине раствор продают. А из метиленового синего можно азур приготовить, он хорошо прокрашивает ядра клеток. Кстати о стекле. Неплохо обезжиривает стекла бытовая химия из разряда "от нагара и застывшего жира", 1 час в не разведенном (можно даже подогретом) средстве предварительно вымытые с мылом стекла вполне нормально обезжириваются. Правда потом отмывать нужно тщательно от щелочи в проточной воде. |
Автор: | guddini [ 13 авг 2014, 23:35 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Я стекла кипячу с "Фейри" в течении часа, потом промываю и в 96% спирт для стерильности. Метиленовый синий из зоомагазина у меня есть. Только вот как из него Азур приготовить? |
Автор: | Rasalam [ 14 авг 2014, 08:48 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
guddini писал(а): Я стекла кипячу с "Фейри" в течении часа, потом промываю и в 96% спирт для стерильности. Метиленовый синий из зоомагазина у меня есть. Только вот как из него Азур приготовить? Азур (точнее смесь азура и метиленового синего) получают длительным (неск. недель) выдерживанием слабо-щелочных растворов метиленового синего при доступе воздуха. В растворе образуется хорошо красящая смесь ззура и метиленового синего (т.н. Азур Б). |
Автор: | guddini [ 14 авг 2014, 10:07 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Rasalam писал(а): Азур (точнее смесь азура и метиленового синего) получают длительным (неск. недель) выдерживанием слабо-щелочных растворов метиленового синего при доступе воздуха. В растворе образуется хорошо красящая смесь ззура и метиленового синего (т.н. Азур Б). А можно поподробнее про технологию... |
Автор: | Rasalam [ 14 авг 2014, 10:42 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
guddini писал(а): Rasalam писал(а): Азур (точнее смесь азура и метиленового синего) получают длительным (неск. недель) выдерживанием слабо-щелочных растворов метиленового синего при доступе воздуха. В растворе образуется хорошо красящая смесь ззура и метиленового синего (т.н. Азур Б). А можно поподробнее про технологию... Ну вот например: Метиленовый синий по Леффлеру: в 100 мл воды добавляют 30 мл насыщенного раствора метиленового синего и 1 мл 1 % раствора КОН. В старых руководствах рекомендуется выдерживать этот раствор для «созревания» в течение не менее 1 месяца. Получается смесь азура и метиленового синего. |
Автор: | Сэм-59 [ 14 авг 2014, 13:17 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Rasalam писал(а): Ну вот например: Метиленовый синий по Леффлеру: в 100 мл воды добавляют 30 мл насыщенного раствора метиленового синего и 1 мл 1 % раствора КОН. В старых руководствах рекомендуется выдерживать этот раствор для «созревания» в течение не менее 1 месяца. Получается смесь азура и метиленового синего. Guddini, в старых руководствах вообще любят "плясать" от насыщенных растворов. Но в любительской практике это крайне неудобно. Тем более, что аптеках и зоо-магазинах обычно продается-то 1%-ный раствор. По моим источникам, метиленовый синий по Леффлеру готовится из насыщенного спиртового раствора. Для метиленового синего насыщенный спиртовой раствор является примерно 3% раствором (источник не помню, но когда-то специально искал концентрации насыщенных растворов красителей). Таким образом, Вы можете пересчитать соотношение воды и купленного раствора метиленового синего. О фукорцине. Там концентрация фуксина составляет ок. 0,4%. Обычно в рецептах фигурируют карболовый фуксин Циля (1% фуксина в 5% р-ре фенола) или водный фуксин Пфайфера (0,1%, который получают растворением фуксина Циля в дист. воде 1:10). Тоже можете прикинуть, надо ли Вам разводить и как. Rasalam, можно ли в метиленовом синем по Леффлеру заменить KOH на NaOH (с понижением концентрации пропорционально молекулярному весу), или ион К тоже важен? |
Автор: | Microbiologist [ 14 авг 2014, 13:40 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
В одном из практикумов по медицинской микробиологии (но не помню точно в каком) было написано, что растворы КОН и NaOH взаимозаменяемы при приготовлении раствора метиленовой сини по Леффлеру. Поэтому ввиду дефицитности КОН, вполне можно взять 1% р-р NaOH. |
Автор: | Rasalam [ 14 авг 2014, 13:50 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Microbiologist писал(а): В одном из практикумов по медицинской микробиологии (но не помню точно в каком) было написано, что растворы КОН и NaOH взаимозаменяемы при приготовлении раствора метиленовой сини по Леффлеру. Поэтому ввиду дефицитности КОН, вполне можно взять 1% р-р NaOH. Можно даже соду взять пищевую в эквивалентном количестве... главное рН раствора метиленовой сини. Правда без хим. образования затруднительно вычислить это эквивалентное количество для правильного РН. |
Автор: | Microbiologist [ 14 авг 2014, 14:22 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Судя по расчётам и да и на практике я проверял - рН готового раствора составляет примерно 10...11. Rasalam писал(а): Microbiologist писал(а): В одном из практикумов по медицинской микробиологии (но не помню точно в каком) было написано, что растворы КОН и NaOH взаимозаменяемы при приготовлении раствора метиленовой сини по Леффлеру. Поэтому ввиду дефицитности КОН, вполне можно взять 1% р-р NaOH. Можно даже соду взять пищевую в эквивалентном количестве... главное рН раствора метиленовой сини. Правда без хим. образования затруднительно вычислить это эквивалентное количество для правильного РН. |
Автор: | Microbiologist [ 14 авг 2014, 14:32 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Поскольку, что калия гидроксид, что натрия гидроксид - сильные электролиты, то рН растворов равной нормальной концентрации будет почти одинаковым. Мне правда не совсем понятно, почему в большинстве руководствах по микробиологии для создания щелочной среды в растворе метиленовой сини по Леффлеру нужно брать довольно дорогой гидроксид калия. Сэм-59 писал(а): Rasalam писал(а): Ну вот например: Метиленовый синий по Леффлеру: в 100 мл воды добавляют 30 мл насыщенного раствора метиленового синего и 1 мл 1 % раствора КОН. В старых руководствах рекомендуется выдерживать этот раствор для «созревания» в течение не менее 1 месяца. Получается смесь азура и метиленового синего. Guddini, в старых руководствах вообще любят "плясать" от насыщенных растворов. Но в любительской практике это крайне неудобно. Тем более, что аптеках и зоо-магазинах обычно продается-то 1%-ный раствор. По моим источникам, метиленовый синий по Леффлеру готовится из насыщенного спиртового раствора. Для метиленового синего насыщенный спиртовой раствор является примерно 3% раствором (источник не помню, но когда-то специально искал концентрации насыщенных растворов красителей). Таким образом, Вы можете пересчитать соотношение воды и купленного раствора метиленового синего. О фукорцине. Там концентрация фуксина составляет ок. 0,4%. Обычно в рецептах фигурируют карболовый фуксин Циля (1% фуксина в 5% р-ре фенола) или водный фуксин Пфайфера (0,1%, который получают растворением фуксина Циля в дист. воде 1:10). Тоже можете прикинуть, надо ли Вам разводить и как. Rasalam, можно ли в метиленовом синем по Леффлеру заменить KOH на NaOH (с понижением концентрации пропорционально молекулярному весу), или ион К тоже важен? |
Автор: | Rasalam [ 14 авг 2014, 14:41 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): Rasalam писал(а): можно ли в метиленовом синем по Леффлеру заменить KOH на NaOH (с понижением концентрации пропорционально молекулярному весу), или ион К тоже важен? Думаю можно, но NaOH нужно взять чуть больше, т.к. КОН более сильное основание. |
Автор: | Сэм-59 [ 14 авг 2014, 17:51 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
С точки зрения молярных концентраций при полной диссоциации 56 г. КОН даст такое же число ионов, что и 40 г. NaOH ... В общем, по совету Microbiologist просто заменю 1% КОН на 1% NaOH. |
Автор: | Rasalam [ 14 авг 2014, 18:33 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Сэм-59 писал(а): С точки зрения молярных концентраций при полной диссоциации 56 г. КОН даст такое же число ионов, что и 40 г. NaOH ... В общем, по совету Microbiologist просто заменю 1% КОН на 1% NaOH. У иона К+радиус больше чем у Na+, электроотрицательность другая и т.п... ну да ладно, для приготовления метиленового синего по Леффлеру это несущественно |
Автор: | guddini [ 16 авг 2014, 19:53 ] |
Заголовок сообщения: | Re: Подготовка препаратов: фиксация. окраска, заключение |
Кто знает, зачем в состав красителя добавляют глицерин? |
Страница 17 из 51 | Часовой пояс: UTC + 3 часа |
Powered by phpBB® Forum Software © phpBB Group https://www.phpbb.com/ |