Сэм-59 писал(а):
Решил попробовать изготовить парафиновые срезы, т.к. нежные ткани без заливки резать очень трудно.
На пробу взял корень фаленопсиса (хотя его можно было бы резать и без заливки, он достаточно плотный). Зафиксировал в ФАА. Проводка: спирт 70%, спирт 85%, спирт 96%, две смены изопропилового спирта, ксилол, раствор парафина в ксилоле, расплавленный парафин. Парафин использовал аптечный. Затем заливка в цилиндры диаметром 18 мм (под размер держателя моего "микротома", сделал два блока).
Делал поперечные срезы. Резал опасной бритвой, угол заточки 20 градусов. Проблема: срез скручивается в трубочку. Чем тоньше срез, тем сильнее. Даже при немедленном переносе в теплую воду далеко не каждый срез расправляется, особенно которые тоньше 20 мкм. Немного подогревал парафиновые блоки (до 30-35 градусов), но это не сильно помогало. Лезвие, разумеется, смачивал. Может, кто-до даст совет, как с этим бороться.
Срезы вылавливал из воды на обезжиренное покровное стекло. После высыхания срезы держались на стекле. Вся дальнейшая обработка была с покровным стеклом - мне так удобнее обрабатывать, в мои баночки предметные не помещаются. Отмывка от парафина в трех сменах ксилола. Проводка с спиртах 96%, 85%, 70%, 50%, 30%. Окраска "почти по Этцольду" - как в предыдущих моих опытах. Обезвоживание в глицерине, заключение в глицерин-желатину.
К сожалению не могу сказать с полной уверенностью так как не знаком с заливкой растительного материала, но дело в парафине, его точка плавления должна лежать от 48 до 56 градусов.
Попробуйте парафин прогреть несколько раз основательно( начнет дымить), а затем вылив в плоское охлажденное с низу судно. или добавить воска до 3-4 % от массы.
Будьте аккуратны с прогреванием парафина, может загореться.
Вход
Регистрация
FAQ
Поиск
