Астрономия и микроскопия

Форум сайта "Два Стрельца"
Текущее время: 28 мар 2024, 12:56

Часовой пояс: UTC + 3 часа




Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 760 ]  На страницу Пред.  1 ... 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ... 51  След.
Автор Сообщение
СообщениеДобавлено: 17 апр 2014, 23:27 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 901
Откуда: Россия, г. Москва
Сэм-59 писал(а):
Юрий писал(а):
...дело в парафине, его точка плавления должна лежать от 48 до 56 градусов.Попробуйте парафин прогреть несколько раз основательно( начнет дымить), а затем вылив в плоское охлажденное с низу судно. или добавить воска до 3-4 % от массы.Будьте аккуратны с прогреванием парафина, может загореться.
Спасибо, Юрий. Как появится время, прежде всего замеряю температуру плавления парафина.


а парафин чистый или косметический?

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 

СообщениеДобавлено: 17 апр 2014, 23:45 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Купил в аптеке. Написано "Paraffinum, для наружного применения". Бесцветный (белесый). Наверное, чистый.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 18 апр 2014, 02:00 
Не в сети

Зарегистрирован: 06 окт 2013, 18:17
Сообщения: 1153
Юрий писал(а):
Сэм-59 писал(а):
Решил попробовать изготовить парафиновые срезы, т.к. нежные ткани без заливки резать очень трудно.

На пробу взял корень фаленопсиса (хотя его можно было бы резать и без заливки, он достаточно плотный). Зафиксировал в ФАА. Проводка: спирт 70%, спирт 85%, спирт 96%, две смены изопропилового спирта, ксилол, раствор парафина в ксилоле, расплавленный парафин. Парафин использовал аптечный. Затем заливка в цилиндры диаметром 18 мм (под размер держателя моего "микротома", сделал два блока).

Делал поперечные срезы. Резал опасной бритвой, угол заточки 20 градусов. Проблема: срез скручивается в трубочку. Чем тоньше срез, тем сильнее. Даже при немедленном переносе в теплую воду далеко не каждый срез расправляется, особенно которые тоньше 20 мкм. Немного подогревал парафиновые блоки (до 30-35 градусов), но это не сильно помогало. Лезвие, разумеется, смачивал. Может, кто-до даст совет, как с этим бороться.

Срезы вылавливал из воды на обезжиренное покровное стекло. После высыхания срезы держались на стекле. Вся дальнейшая обработка была с покровным стеклом - мне так удобнее обрабатывать, в мои баночки предметные не помещаются. Отмывка от парафина в трех сменах ксилола. Проводка с спиртах 96%, 85%, 70%, 50%, 30%. Окраска "почти по Этцольду" - как в предыдущих моих опытах. Обезвоживание в глицерине, заключение в глицерин-желатину.


К сожалению не могу сказать с полной уверенностью так как не знаком с заливкой растительного материала, но дело в парафине, его точка плавления должна лежать от 48 до 56 градусов.
Попробуйте парафин прогреть несколько раз основательно( начнет дымить), а затем вылив в плоское охлажденное с низу судно. или добавить воска до 3-4 % от массы.
Будьте аккуратны с прогреванием парафина, может загореться.

Проблема скручивания парафина при резке - толщина среза, если она больше 10 -15 µm, то скручивания Вы не избежите.( из немецкого форума по микроскопии -mikroskopie-forum.de(http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=10480.0 - это другая ссылка из этого форума, иллюстрированный процесс окраски).)Помимо воска, для улучшения пластичности парафина, можно добавить аптечный димексид - он же диметилсульфоксид, кстати, он великолепно увеличивает саму пенетрацию, т.е. можно его добавлять и в фиксаторы( из форумов судебных медиков).
Цитата:
Зарубежные фирмы производят специальный парафин для гистологических исследований, содержащий раз­личные пластические полимеры, такие как диметилсульфоксид. Их коммерческие названия «Парапласт», «Парапласт плюс», «Гистопласт С», «Гистозес».
-http://www.forens-med.ru/book.php?id=515
----------------------
Впрочем, по первой немецкоязычной ссылке
Цитата:
In der Histologie und Pathologie ist eine Schnittdicke von 4 bis 5 µm schon eher dick. .Für einen guten Schnitt empfehle ich:
- Gutes Qualitäts-Paraffin verwenden (Paraplast lässt sich sehr gut schneiden)
- Blöcke eine Nacht kühlen im Kühlschrank und erst unmittelbar vor dem Einspannen aus dem Schrank holen

В гистологии и патологии толщина среза от 4 до 5 µm уже достаточно значительна.( Прим. но это для животных тканей, для растительных 10 - 15 µm)
Для получения хорошего среза я рекомендую:
-Качественный парафин( Парапласт великолепно режется)
-Блоки перед резкой в течение ночи охладить в холодильнике и достать оттуда непосредственно перед креплением.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 18 апр 2014, 02:21 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 901
Откуда: Россия, г. Москва
adam писал(а):
Проблема скручивания парафина при резке - толщина среза, если она больше 10 -15 µm, то скручивания Вы не избежите.( из немецкого форума по микроскопии -mikroskopie-forum.de(http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=10480.0 - это другая ссылка из этого форума, иллюстрированный процесс окраски).)Помимо воска, для улучшения пластичности парафина, можно добавить аптечный димексид - он же диметилсульфоксид, кстати, он великолепно увеличивает саму пенетрацию, т.е. можно его добавлять и в фиксаторы( из форумов судебных медиков).
Цитата:
Зарубежные фирмы производят специальный парафин для гистологических исследований, содержащий раз­личные пластические полимеры, такие как диметилсульфоксид. Их коммерческие названия «Парапласт», «Парапласт плюс», «Гистопласт С», «Гистозес».
-http://www.forens-med.ru/book.php?id=515


Срезы сморщенные, прилипают к поверхности ножа, закручиваются
Причина
Недостаточный угол наклона ножа
Высокая температура в помещении
Материал залит в легкоплавный парафин

Устранение>
Изменить угол наклона ножа
Перед срезами материал поместить в холодильник
Перезалить в более тугоплавкий парафин

Насчет диметилсульфоксида, о его наличии только заявляют производители гомогенизированного парафина (парапласт и тд и тп) но существенного улучшения качества пропитывания при использование ДМСО я не увидел.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 18 апр 2014, 02:26 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 901
Откуда: Россия, г. Москва
adam писал(а):
Юрий писал(а):
Сэм-59 писал(а):
Решил попробовать изготовить парафиновые срезы, т.к. нежные ткани без заливки резать очень трудно.

На пробу взял корень фаленопсиса (хотя его можно было бы резать и без заливки, он достаточно плотный). Зафиксировал в ФАА. Проводка: спирт 70%, спирт 85%, спирт 96%, две смены изопропилового спирта, ксилол, раствор парафина в ксилоле, расплавленный парафин. Парафин использовал аптечный. Затем заливка в цилиндры диаметром 18 мм (под размер держателя моего "микротома", сделал два блока).

Делал поперечные срезы. Резал опасной бритвой, угол заточки 20 градусов. Проблема: срез скручивается в трубочку. Чем тоньше срез, тем сильнее. Даже при немедленном переносе в теплую воду далеко не каждый срез расправляется, особенно которые тоньше 20 мкм. Немного подогревал парафиновые блоки (до 30-35 градусов), но это не сильно помогало. Лезвие, разумеется, смачивал. Может, кто-до даст совет, как с этим бороться.

Срезы вылавливал из воды на обезжиренное покровное стекло. После высыхания срезы держались на стекле. Вся дальнейшая обработка была с покровным стеклом - мне так удобнее обрабатывать, в мои баночки предметные не помещаются. Отмывка от парафина в трех сменах ксилола. Проводка с спиртах 96%, 85%, 70%, 50%, 30%. Окраска "почти по Этцольду" - как в предыдущих моих опытах. Обезвоживание в глицерине, заключение в глицерин-желатину.


К сожалению не могу сказать с полной уверенностью так как не знаком с заливкой растительного материала, но дело в парафине, его точка плавления должна лежать от 48 до 56 градусов.
Попробуйте парафин прогреть несколько раз основательно( начнет дымить), а затем вылив в плоское охлажденное с низу судно. или добавить воска до 3-4 % от массы.
Будьте аккуратны с прогреванием парафина, может загореться.

Проблема скручивания парафина при резке - толщина среза, если она больше 10 -15 µm, то скручивания Вы не избежите.( из немецкого форума по микроскопии -mikroskopie-forum.de(http://www.mikroskopie-forum.de/index.php?topic=10480.0 - это другая ссылка из этого форума, иллюстрированный процесс окраски).)Помимо воска, для улучшения пластичности парафина, можно добавить аптечный димексид - он же диметилсульфоксид, кстати, он великолепно увеличивает саму пенетрацию, т.е. можно его добавлять и в фиксаторы( из форумов судебных медиков).
Цитата:
Зарубежные фирмы производят специальный парафин для гистологических исследований, содержащий раз­личные пластические полимеры, такие как диметилсульфоксид. Их коммерческие названия «Парапласт», «Парапласт плюс», «Гистопласт С», «Гистозес».
-http://www.forens-med.ru/book.php?id=515
----------------------
Впрочем, по первой немецкоязычной ссылке
Цитата:
In der Histologie und Pathologie ist eine Schnittdicke von 4 bis 5 µm schon eher dick. .Für einen guten Schnitt empfehle ich:
- Gutes Qualitäts-Paraffin verwenden (Paraplast lässt sich sehr gut schneiden)
- Blöcke eine Nacht kühlen im Kühlschrank und erst unmittelbar vor dem Einspannen aus dem Schrank holen

В гистологии и патологии толщина среза от 4 до 5 µm уже достаточно значительна.( Прим. но это для животных тканей, для растительных 10 - 15 µm)
Для получения хорошего среза я рекомендую:
-Качественный парафин( Парапласт великолепно режется)
-Блоки перед резкой в течение ночи охладить в холодильнике и достать оттуда непосредственно перед креплением.


4-5 мкм нужны исключительно для цитологов, для патологов до 10 мкм самое то, нервная ткань вообще 20мкм режется.
ну иногда онкогематологи которые сидят на микроскопах просят 4-5 мк срезы лимфоузлов или биоптаты косного мозга.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 18 апр 2014, 22:59 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Юрий писал(а):
...дело в парафине, его точка плавления должна лежать от 48 до 56 градусов...

"Равновесная каша" жидкого и нерасплавленного парафина получается при 51 градусе; вроде попадает в диапазон...
adam писал(а):

Спасибо, полезная ссылка. Попробую охладить блок в морозилке.
А вот по-немецки не читаю :(


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 20 апр 2014, 21:31 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 25 сен 2013, 12:01
Сообщения: 1426
Откуда: Москва
Юрий писал(а):
...дело в парафине

Юрий, а чистый воск подойдет?


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 21 май 2014, 15:22 
Не в сети

Зарегистрирован: 10 май 2013, 09:49
Сообщения: 433
Откуда: Санкт-Петербург
Решил немного поиграть.
Приготовил глицерин-желатин для заключения образцов по рецепту приведенному здесь http://microtome.info/documents/micropreparaty.html

Появилось два вопроса:
1. Какой должен быть показатель преломления? Измерения на рефрактометра дали число 1.403
2. Какой консистенции должна быть смесь при комнатной температуре? У меня получилось консистенции жидкого холодца.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 21 май 2014, 19:01 
Не в сети

Зарегистрирован: 28 ноя 2009, 20:24
Сообщения: 1113
Откуда: Омск
Cocteau писал(а):
Решил немного поиграть.
Приготовил глицерин-желатин для заключения образцов по рецепту приведенному здесь http://microtome.info/documents/micropreparaty.html

Появилось два вопроса:
1. Какой должен быть показатель преломления? Измерения на рефрактометра дали число 1.403
2. Какой консистенции должна быть смесь при комнатной температуре? У меня получилось консистенции жидкого холодца.


Мы готовили глицерин-желатин так: 10 г пищевого желатина, 60 мл дистиллированной воды, глицерин 70 мл, кристаллик тимола. Желатин заливается водой и 3 часа набухает. За это время кристаллик тимола растворяем в глицерине. Затем глицерин наливаем в раствор желатина и всё это нагреваем на водяной бане, помешивая стеклянной палочкой. Когда образуется однородная масса, то можно её пропустить через ситечко, чтобы удалить комочки.
Затем в раствор добавляем яичный белок и всё доводим ко кипения. Это для очистки глицерин-желатина от грязи. Затем раствор разливаем в чистые чашки Петри, после застывания нарезаем кубиками и храним в чистой широкой банке или в чашках Петри, без доступа пыли.

Консистенция глицерин-желатина в виде нормального застывшего холодца, не жидкого.
Обычно показатель преломления равен 1,48.

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 22 май 2014, 09:23 
Не в сети

Зарегистрирован: 10 май 2013, 09:49
Сообщения: 433
Откуда: Санкт-Петербург
Нужно разбираться. Поскольку соотношение основных компонентов в обоих случаях одинаково.
Готовил на дистиллированной воде, глицерин из аптеки, желатин также пищевой (не в пластинках - а гранулированный).


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 22 май 2014, 09:36 
Не в сети

Зарегистрирован: 28 ноя 2009, 20:24
Сообщения: 1113
Откуда: Омск
Я не знаю какой глицерин в аптеках, мы использовали химически чистый (ХЧ) глицерин.

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 22 май 2014, 10:08 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 05 дек 2012, 22:15
Сообщения: 751
Откуда: Одесса
Cocteau, а пробовали на рефрактометре измерить показатель преломления аптечного глицерина? Легко установить, это чистый, или водный раствор.
У меня тоже глицерин ХЧ, желатин пищевой из гастронома, готовил без кипячения с белком, консистенция "твердого" холодца.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 22 май 2014, 11:01 
Не в сети

Зарегистрирован: 10 май 2013, 09:49
Сообщения: 433
Откуда: Санкт-Петербург
Сэм-59 писал(а):
Cocteau, а пробовали на рефрактометре измерить показатель преломления аптечного глицерина? Легко установить, это чистый, или водный раствор.
У меня тоже глицерин ХЧ, желатин пищевой из гастронома, готовил без кипячения с белком, консистенция "твердого" холодца.



Спасибо большое! Я сам не додумался измерить показатель преломления аптечного глицерина. Он оказался равен 1.4527. А значит в аптеке купил 85% раствор глицерина в воде.


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 27 май 2014, 19:22 
Не в сети

Зарегистрирован: 03 мар 2014, 05:38
Сообщения: 1060
уважаемые специалисты
подскажите чем лучше заделывать край покровного стекла
делаю толстые препараты на глицерин желатине до 4 мм
получается хорошо но без заделки края они усыхают и трудно ими пользоватся
использую круглые покровные стекла

на старинных микропрепататах видел заделку края в виде черного кольца
как они это делали ?


Вернуться к началу
 Профиль  
 
СообщениеДобавлено: 27 май 2014, 21:32 
Не в сети
Аватара пользователя

Зарегистрирован: 11 мар 2009, 11:12
Сообщения: 901
Откуда: Россия, г. Москва
белых писал(а):
уважаемые специалисты
подскажите чем лучше заделывать край покровного стекла
делаю толстые препараты на глицерин желатине до 4 мм
получается хорошо но без заделки края они усыхают и трудно ими пользоватся
использую круглые покровные стекла

на старинных микропрепататах видел заделку края в виде черного кольца
как они это делали ?


насчет старинных препаратов ответить не могу.
современные:
глицерин желатин можно окантовывать ЦАПОН лаком ( прозрачным или на ваш выбор).
или 10% раствором полистирола в ксилоле, но это вариант может давать трещины без добавления пластификатора.
так же можно использовать раствор в том же ксилоле- парафина, это вариант не проверен на долговечность.
окантовывать можно обычной маленькой кисточкой в 4-5 слоёв последовательно.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02


Вернуться к началу
 Профиль  
 
Показать сообщения за:  Поле сортировки  
Начать новую тему Ответить на тему  [ Сообщений: 760 ]  На страницу Пред.  1 ... 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ... 51  След.

Часовой пояс: UTC + 3 часа


Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и гости: 50


Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете добавлять вложения

Найти:
Перейти:  
Создано на основе phpBB® Forum Software © phpBB Group
Русская поддержка phpBB
Яндекс.Метрика