Астрономия и микроскопия

С фенолом ничего не происходит годами в т.ч. на морозе, если его хранить правильно (без доступа воздуха и света). Какой-то неправильный у вас фенол, это точно фенол (С6Н5ОН)?. У меня фенол еще советский, его правильно хранили, кристаллы бесцветные, как и положено (розоватый цвет кристаллов - верный признак того, что хранили фенол не правильно, разумеется это относится к реактиву квалификации чда и выше).
С формалином интереснее. У него действительно короткий срок годности. Перевозят его в подогреваемых цистернах и хранят при температуре не ниже комнатной, а лучше выше (я храню на батарее отопления ). Если при хранении образуется легкая муть или небольшой осадок параформа, то его можно попробовать растворить нагреванием формалина на водяной бане (можно чуть подкислить), затем отфильтровать. Формалин, который хранили на морозе необратимо испорчен.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

По поводу формалина,если все еже осадок выпал, выбрасывать ничего не надо, отфильтровать осадок.
Из параформальдегида готовят фиксаторы свободные от метанола

4% ф-д по Гайеру
· 2гр параформальдегида + 50мл 0,1М фосфатного буфера(рН 7,4-7,6)=нагревают до 70с до просветления раствора, помешивают, охлаждают и фильтруют. Его рН 7,3-7,5.

40% ф-д по Глауерт
· готовят 40% параформальдегид(40гр порошка формальдегида + 100мл дистиллированной воды при нагревании до 65С, перемешивая.
+ несколько капель 40%гидроксида натрия до просветления раствора(не обезательно).

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02

Юрий, это относится к готовым препаратам параформа. Если осадок выпал при хранении формалина (тем более на морозе), это уже не параформ в чистом виде, там смесь полимеров формальдегида, полимеризация дальше параформа идет, такой "параформ" в воде не растворяется, в т.ч. при нагревании в щелочной среде. Сухой осадок можно разложить термически, но он не разлагается целиком на формальдегид, очень много побочных продуктов.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

Ничего пока не испортилось. Насчет фенола срок годности 45 суток - это из: Фрайштат Д.М. Реактивы и препараты для микроскопии. Вот я и засомневался, как бы впрок отложить. Продают-то его зараза килограммами
Спасибо, Юрий и Rasalam, что объяснили.

И пара вопросов по жидкости Карнуа. Посмотрел литературу - нашел несколько модификаций:
1 - Карнуа (классический, как я понял) [1, 2]: этанол 96% - 6 частей, хлороформ - 3 части, уксусная кислота - 1 ч.
2 - Измененный Карнуа [1]: этанол 70% - 90 мл, уксусная кислота - 5 мл, формалин - 5 мл.
3 - "другой" Карнуа [3]: этанол 96% - 1 часть, уксусная кислота - 1 часть, без хлороформа!
Все расписано, как применять и т.п. Но меня еще интересует применительно к бактериям, например для окраски по Пешкову. Для бактерий не могу найти рекомендации. Вопрос в том, можно ли использовыть версии без хлороформа, собственно, какова роль хлороформа при фиксации бактерий? И второй - можно ли долго хранить жидкость Карнуа (модификции)?

1. Прозина М.Н. Ботаническая микротехника. 1960.
2. Барышкина Р.П. и др. Спаравочник по ботанической микротехнике. Основы и методы. 2004.
3. Абрамова Л.И. и др. Цитологическая и цитоэмбриологическая техника (для исследования культурных растений). Методические указания. 1982.

_________________
Микмед-6 вар. 74., Микмед-2 вар. 11.

Для бактерий фиксатор Карнуа применять смысла нет. Вполне достаточно спирта или на огне фиксировать.

_________________
"Теория без практики мертва и бесплодна, а практика без теории бесполезна и пагубна» П.Л. Чебышёв.
================
Бимам Р-13. Микмед 2 вар. 11. МФН-11. КФ-4М. ОИ-30. КОН-6К. Canon 550D.
Набор объективов Leitz Wetzlar NPL Fluotar.

Фиксатор Карнуа готовят непосредственно перед фиксацией и как правило не хранят. Поскольку хлороформ сам по себе не является фиксатором, его задача насколько понимаю - смягчить действие фиксирующих агентов (этанола и уксусной кислоты). Возможно также, что хлороформ специфически взаимодействует с компонентами бактериальной клетки, позволяя применять различные методы дифференциальной окраски.
Попробуйте без хлороформа, хоть и найти его не такая уж проблема, может быть и без него у вас все получится. А кстати, зачем вам фиксатор Карнуа ? Обычно препараты бактерий фиксируют нагреванием, химические фиксаторы используются для специальных целей как правило.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

Такой срок годности видимо указывают из-за того, на свету в растворе технического формалина образуется муравьиная кислота. А она мешает нормальной фиксации объектов, может вызвать осадок в тканях объекта и т.д.
Поэтому формалин нейтрализуют, применяя как современные добавки, так и "по старинке": в тёмную бутылку насыпают слой углекислого кальция и наливают формалин, периодически встряхивают. Через сутки-двое сливают формалин и процеживают через мелкое ситечко и т.п.
Иногда при длительном хранении формалина выпадает белый осадок. Не страшно, сутки-двое при температуре около 50-70 градусов и осадок растворится. Главное храните формалин в тёмном месте и лучше в тёмной посуде.

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/

Фиксатор Карнуа используется для тонких цитологических исследований( кариотипирование( наблюдение хромосом) к примеру. И хлороформ способствует максимально быстрому проникновению этанола и уксусной кислоты в клетку, т.е. быстрой коагуляции её структур, что важно для цитологических исследований.

Кстати о птичках. Давно думал чем заменить прекурсоры - хлороформ (ака трихлорметан) и ледяную уксусную кислоту в фиксаторе Карнуа. Или вообще вместо него FAA или спирт-формол использовать. Думал-думал, а без эксперимента не проверить. Ну, значит, прорастил луковицу, сварил ацетокармин (как наркоша ханку ). Нарезал корешков луковых в FAA и спирт-формол, профиксировал, промыл, покрасил с подогревом, подавил - ничего не получается, ядра вроде красятся, но не все и нечетко.
Решил такую пропись составить:
спирт 95% - 6 частей
четыреххлористый углерод (ака тетрахлорметан) - 4 части
уксусная кислота 70% пищевая - 2 части
фиксировал 4 часа, промывал 70 % спиртом трижды по 10 минут, красил ацетокармином с подогревом 10-15 минут, раздавил на стекле и вот результат



Другие снимки выложу в разделе фото.

_________________
"Теория без практики мертва и бесплодна, а практика без теории бесполезна и пагубна» П.Л. Чебышёв.
================
Бимам Р-13. Микмед 2 вар. 11. МФН-11. КФ-4М. ОИ-30. КОН-6К. Canon 550D.
Набор объективов Leitz Wetzlar NPL Fluotar.

Очень даже годный результат, все что должно было покраситься - покрасилось как надо.

_________________
МБИ-3, МБИ-11, МБС-2, МБИ-4, МИН-8, МББ-1А, КФ-1, КФ-4, МФА-2

И как тут их подсчитывают? Не говоря уже о кариотипе?

_________________
Микмед-6 вар. 74., Микмед-2 вар. 11.

Растворил полистирол в ксилоле.
Вроде пропорции соблюдал, но столкнулся с тем что полистирол грязный (выпал рыхлый осадок на дне) и сама среда густая как мне кажется.
Кто работал с полистиролом подскажите, какая густата должна быть (ориентиром пусть будет мёд)?
Заранее благодарен за помощь.

_________________
Все мои ошибки считать копирайтом.

Для этого куотивируют объект в среде с добавлением цитостатического препарата( классический вариант-колхицин) я пользуюсь метотрексатом или винбластином. цитостатический препарат просто добавляют в раствор.

https://sites.google.com/site/alliumtestpublic/Books/MetodOfScience/OSProhorova03#TOC-I.-



https://sites.google.com/site/warehouse000/home/Gen013.jpg

https://sites.google.com/site/warehouse000/home/Gen014.jpg

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02

Да, бывает такое, а источник полистирола? Лучше использовать пищевые стаканчики, знак (PS). обязательно добавлять пластификатор без него результат будет печальный, трещины и тд.

_________________
мой сайт http://labx.narod.ru/
Polyvar, Zeiss Imager Z1, Jenaval, Микротом Reichert Jung Biocut 2030, К.М.Н. 14.03.02

Использовал пенопластовые ячейки от яиц, с цифровой 5 в треугольнике.
Пластификатор использовался.
Осадок не приятен, но с ним я разберусь.
Сниму чистый слой, либо состряпаю центрифугу из дрели.
Меня больше волнует густота.
У меня капля по покровному стеклу практически не растекается.
Так как это мои первые попытки, тренируюсь на сухой мухе и бракованных (сколы углов) покровных стёклах.
Результат совсем не радует
В среде остались микро пузыри воздуха, лапку при сжатии разорвала на 2 части и у основании лапки (под ней) пузырь воздуха.

Вот возник второй вопрос.
На предметное стекло сперва полистирол и после лапку и прижать покровным стеклом?, или на оборот???
Или вовсе капля, лапка, капля и покровное стекло?

Юрий стаканчики растворять пенопластовые или прозрачные?
Может тут у меня тоже косяк?

_________________
Все мои ошибки считать копирайтом.