Астрономия и микроскопия

Резкость такая хорошая на этом одноклеточном. А вы откуда его извлекли и как определяете их размер? Это фото с вашей приспособленной веб-камеры?

Попробую ответить на вопрос, хотя сразу оговорюсь, что фитопатология не является моим основным направлением деятельности. При поражении растительной ткани ее заражение микрофлорой увеличивается в геометрической прогрессии, определить видовой состав просмотром мазков невозможно. Состав микрофлоры будет зависеть от химического состава питательного субстрата и условий (наличие кислорода, температура). На белковых субстратах это будут преимущественно аммонификаторы, на растительных - многие группы микроорганизмов (целлюлозоразлагающие, молочнокислые, маслянокислые, грибы и т.д.). Совокупность микрофлоры на растительных субстратах называют просто "сапрофитная микрофлора". Идентификация болезней растений проводится, как правило, по характеру повреждения растения. И только в случае подозрения на карантинные заболевания растений применяют посев на селективные среды с определенным набором антибиотиков, которые будут подавлять развитие мешающей определению сапрофитной микрофлоры. Если колония вырастет, окончательное определение проводят методами ИФА или ПЦР.

Организмы выросли в банке с водой. Жена собирает дождевую воду для полива цветов. И вот одна из банок содержала какую-то муть на дне и довольно долго постояла в тепле. Вода в ней даже завоняла. Тут я и влез в неё со своим микроскопом. Размер определяю с помощью программы Micam-1.4 Через неё и наблюдаю. Один раз сделал калибровку своих объективов и камеры по калибровочному препарату (для этого подходит шкала из окуляра с шагом делений 0,1мм.) и теперь могу мерять всех наблюдаемых "чертей" с достаточной для любительских целей точностью. Фото с моей веб камеры. Резкость получается неплохая, но в таком режиме (зажата апертурная диафрагма) картинка получается искажена дифракцией и разрешение не максимально возможное. Хотя и так неплохо, как для неокрашенных объектов. Вот фото дохлой коловратки (Pterobdina) помоему, которую я померял.

Не похожа на коловратку...Не видно ног, головы, мастакса и т.д.
Честно говоря, не помню такое родовое название Pterobdina...Можно ссылку?

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/

По таким фотографиям очень сложно определять простейших...Жгутиконосцев очень много...Многие жгутиконосцы могут образовывать псевдоподии (как амёбы), тем самым захватыая пищу. У других жгутиконосцев есть малозаметный клеточный рот, в который они подгоняют пищу благодаря жгутикам. Может Ваш объект из семейства Bodonidae, типа известного Bodo repens и т.п.
"Чёрт" - это похоже ресничная инфузория

_________________
Мой блог: http://microcosmos555.blogspot.ru/

Я тоже не уверен, в этом я не спец, но похоже на коловратку под номером 8 вот от сюда http://www.aqua.grodno.net/razvedenie_kolovratok И опечатался немного в названии Pterodina. Живые особи как пропеллером вертят и создают круговоротики мелких частичек. По фото труднее определить чем по видео записи. Как придумаю куда видео скинуть, то обозначу ссылочку. "Чёрт" действительно похож на брюхоресничную инфузорию (Stylonichia mytilus) - http://biomedic.com.ua/biologicheskaya_entsiklopediya/page/klass_infuzorii_INFUSORIA_ili_CILIATA.118/. А жгутиковое весьма похоже на Bodo repens.

Давайте вернемся к заявленной теме: публиковать и обсуждать всевозможные эксперименты (опыты) для последующего повторения с детьми.

Весьма эффектно под микроскопом выглядит кожица листа тюльпана - у него достаточно крупные и клетки эпидермиса, и клетки устьиц. Для приготовления препарата кроме собственно листа тюльпана запаситесь в аптеке препаратом ФОРМИДРОН (содержит формалин для фиксации), препаратом ФУКОРЦИН - этот препарат готовится с красителем фуксином (основным, подойдет для окраски клеток), медицинским спиртом (для обезвоживания) и глицерином (для просветления) - все препараты стоят недорого.
Возьмите лист тюльпана, надломите его так, чтобы не порвался эпидермис с нижней стороны листа, сложите лист на изломе и, сдвигая одну часть листа вдоль другой, Вам удастся содрать достаточно большой участок эпидермиса - одноклеточного слоя, как у кожицы лука. Кожицу поместите в баночку с формидроном - она там будет сохраняться для наших опытов.
Отрежьте фрагмент кожицы и поместите его минут на 30-40 в раствор фукорцина. Кожица приобретет густой малиновый цвет. После этого ее необходимо будет промыть так, чтобы краситель остался только в ядрах, но ушел из цитоплазмы клеток. Для этого нужно приготовить несколько спиртовых растворов разных концентраций: 50%, 70%, и 85%. Поочередно помещаем на 10-15 минут окрашенную кожицу в спиртовые растворы возрастающей концентрации, начиная с 50% и заканчивая 96%. Затем переносим кожицу в глицерин и выдерживаем там не менее часа. После чего кладем ее на предметное стекло, расправляем и накрываем покровным. Рассматривать можно, начиная с малых увеличений.
Если препарат окажется перекрашен или недокрашен - изменяем время окраски в следующих пробах. Удачный препарат можно заключить в глицерин-желатин, он будет долго сохраняться.

Интересно. Если будите готовить препарат, то выложите сюда фотографию.

К сожалению, не располагаю "правильной" камерой для микроскопа. Да и объективы - не планапохроматы Снял через окуляр (тоже не гомаль) Н7х на примитивную веб-камеру + Micam 1.4, поэтому прошу строго не судить.

Объектив 20х, освещение - упрощенный ОИ32, микроскоп - школьный УМ-301 с самодельным конденсором (N.A. до 0.45, ирисовая диафрагма), микроскоп+камера+Micam откалиброваны по объект-микрометру ОМП.

Неплохо, устьица хорошо окрасились а заместо спирта ацетоном можно промывать

Не встречал таких рекомендаций, но я не биолог, так что не могу категорически ответить «нет». В классике описанная мною процедура называется "проводка через батарею спиртов возрастающей концентрации", ее цель - обезводить препарат: спирт вытягивает воду из клеток, но если сразу налить чистый спирт, то скорость обезвоживания будет такой, что повредит внутриклеточные структуры. Промывка от красителя здесь получается как побочный эффект. Обычно же в методиках подготовки препаратов есть специальный шаг - "дифференцирование" - для промывки "ненужной" краски.

Красиво. Хорошая окраска получилась. Весьма интересный объект.

ацетон используется как фиксатор и то нечасто

_________________
Оборудование
/микроскопы Сarl Zeiss Axiophot, Carl Zeiss Jena Jenaval Interphako, Микмед-1
/микротомы Leitz 1512, МС-2/

Наблюдение за живыми простейшими всегда вызывает живой интерес у детей. Препарат изготовить вроде просто – да вот беда, быстро высыхает. Есть метод «висячей капли во влажной камере» – препарат готовится на специальном предметном стекле с лункой; в таком препарате протоза и прочая одноклеточные могут жить несколько суток. Я расскажу, как сделать подобные препараты без стекла с лункой (его не везде можно купить, да и стоит оно неадекватно).
Для этого понадобятся обычное предметное стекло, покровные стекла двух размеров: 18х18 и 22х22 мм. (можно 24х24), немного яичного белка, вазелина и воска.
Готовим белковый клей: взбиваем немного белка до пены, даем отстояться, и фильтруем через фильтровальную бумагу или салфетку. Отрезаем от покровного стекла 18х18 (я резал алмазным резаком; нужно подобрать силу нажима, с первого раза может не получиться) 2 полоски шириной ок. 5 мм. Покровное стекло большего размера разрезаем пополам. Белковым клеем приклеиваем обрезки на предметное стекло ровными (фабричными) краями вовнутрь, как нарисовано: сиреневым цветом – полоски от стекла 18х18, синим – кусочки большего стекла. Перед склеиванием стекла нужно обезжирить. Даем клею засохнуть. Получается камера глубиной 0,17 мм. Далее наносим на внешние стороны приклеенных стекол тонкий слой вазелина (желтый пунктир). Слой не сплошной, чтобы при накрывании покровным стеклом лишний воздух мог свободно выйти. Удобнее всего это делать разогретым стоматологическим шпателем, чтобы вазелин растекался. Далее на еще одно большое покровное стекло капаем каплю для исследования, аккуратно переворачиваем стекло и накрываем им нашу конструкцию. Сделать это нужно так, чтобы капля, коснувшись предметного стекла, не утекла к краям "камеры". На предметное стекло в месте касания капли можно положить несколько волокон ваты или нитчатых водорослей (у меня культивируется запас с лета) – шустрые простейшие могут останавливаться около таких объектов. Теперь нужно разогреть немного воска и мягкой кисточкой заделать края покровного стекла и выступающие за него стыки обрезков, образующих камеру. Препарат готов, несколько дней можно наблюдать в любое удобное время.
С таким препаратом дети могут пронаблюдать, например, процесс деления одноклеточных организмов (мы дома наблюдали деление некоторых инфузорий и одноклеточных водорослей), динамику изменения численности жителей препарата.
С препаратом нужно обращаться аккуратно, сильно не наклонять, чтобы капля не стекла к краям.

Интересно, а как выглядит фабричное стекло с лункой. Каков размер и глубина лунки? Какая форма у лунки - сферическая или равномерное цилиндрическое углубление? Допустима ли матовость на дне лунки или стекло должно быть абсолютно гладким?
Я все это к чему спрашиваю - если подходит сферическая лунка с небольшой матовостью, то ее, в принципе, несложно вышлифовать самому. Особенно участникам этого форума, многие из которых являются также любителями астрономии и наверняка в далекие годы тотального дефицита в той или иной степени занимались шлифованием зеркал.
У кого-то есть конкретный опыт самостоятельного вышлифовывания лунки?
У меня например, остались два тонких шлифопорошка ("минутника") М40 и М10 с помощью которых несложно сделать сферическое углубление с мелкоматовой поверхностью. Есть также полирит, с помощью которого матовость можно было бы слегка сполировать.
У кого-нибудь есть какие-то соображения по этому вопросу?
С уважением,
Константин